丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基通过活化Toll样受体4影响单核细胞分泌细胞因子

摘要

目的：探讨丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基（PDC-E2）是否可以活化Toll样受体4（TLR4）-NF-κB通路，并通过该通路诱导单核细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素12（IL-12）和可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）。方法：培养单核细胞株U937，分为空白对照组、PDC-E2组、PDC-E2+HTA125组和PDCE2+PDTC组。空白对照组不予任何刺激；PDC-E2组予2、10和50μg/mL的PDC-E2刺激；PDC-E2+HTA125组予10μg/mL的TLR4功能抑制抗体HTA125孵育4h后，再加入50μg/mL的PDC-E2；PDC-E2+PDTC组加入100nmol/mL的NF-κB抑制剂PDTC0.5h后，再加入50μg/mL的PDC-E2。通过流式细胞术检测TLR4表达，EMSA实验检测NF-κB活化情况，ELISA法检测培养上清TNF-α、IL-12和sTRAIL浓度。结果：2、10和50μg/mL浓度PDC-E2刺激U937细胞24h，TLR4表达均明显增加，但无浓度依赖性。浓度为50μg/mL的PDC-E2刺激U937细胞1h，NF-κB即显著活化；至2h，活化逐渐减少；至4h，已明显减少。加入HTA125后，NF-κB活性较阻断前显著降低。浓度为50μg/mL的PDC-E2刺激U937细胞24h，培养上清TNF-α和sTRAIL的浓度显著高于空白对照组（P＜0.05），IL-12与空白对照组比差异无统计学意义；至48h和72h，TNF-α、IL-12和sTRAIL的浓度均显著高于空白对照组（P＜0.05）。加入HTA125或PDTC后，各时间点3种细胞因子的浓度均较阻断前显著降低（P＜0.05）。结论：PDC-E2可以活化TLR4-NF-κB通路，并通过该通路刺激单核细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-12和sTRAIL。