陕北白绒山羊KAP9.2基因腺病毒载体的构建及包装

摘要

研究旨在构建能够表达KAP基因家族角蛋白相关蛋白9.2 (KAP9.2)基因的腺病毒载体,为研究KAP9.2在绒山羊绒毛生长中的功能奠定基础.通过外科手术采集陕北白绒山羊皮肤组织,采用酚/氯仿法提取其基因组,设计引物,通过PCR技术扩增KAP9.2基因.通过酶切连接构建pAdTrack-KAP9.2穿梭载体.将该穿梭载体经Pme Ⅰ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经过卡那霉素抗性筛选获得重组腺病毒载体pAdEasy-KAP9.2.将pAdEasy-KAP9.2经Pac Ⅰ酶切线性化后转染HEK293人胚肾细胞,培养7d后收集细胞,反复冻融破碎细胞,离心收集病毒.在病毒扩增4次后,采用LaSRT法测定其滴度.最终测得病毒滴度为1.34×108 GFU/mL.研究成功包装KAP9.2基因重组腺病毒颗粒.