一种简便高效利用重叠延伸PCR进行基因定点突变的方法

摘要

目的:建立一种简便快速的重叠延伸PCR基因定点突变方法.方法:采用重叠延伸PCR的方法将人TGF-β2基因启动子区(-270bp～+280bp)-114bp的5'CGTG3'序列定点突变为5'TTTG3',前两次PCR反应产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后无需纯化,直接将胶条切下置于EP管中,-80℃冷冻10min,然后将胶条离心后分别取上清液作为模板进行第三次PCR,以获得全长的突变目的基因,最后将此突变基因插入报告载体pGL3-Basic进行基因测序.结果:人TGF-β2基因启动子区突变序列的测序结果与预期完全一致.结论:此方法简便经济、突变准确,是一种非常实用的基因定点突变方法.