土壤总DNA中草甘膦N-乙酰转移酶基因的克隆及酶学特性分析

摘要

实验通过PCR程序从提取的土壤总DNA中扩增出草甘膦N-乙酰转移酶基因(gat),酶解后插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pGEX-6p-1,获得克隆株.基因测序表明,与GenBank中的AX543338核苷酸序列有99.3%的同源性.将GAT经亲和层析纯化后,对该酶的酶学性质进行了初步分析,结果表明,该酶的最适温度为30℃,最适反应pH 7.检测了6种金属离子对酶活性的影响,发现单价离子K+和Na+对GAT的激活作用高于双价离子Mg2+和Mn2+,其中Na+的激活作用最强,而Ca2+有明显的抑制作用.