甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶基因ace-3全长cDNA的克隆和序列分析

摘要

利用RT-PCR结合RACE技术克隆了甘薯茎线虫(Ditylenchus destructor)乙酰胆碱酯酶基因cDNA,Dd-ace-3,提交GenBank登录号EF583057.该cDNA序列5'端存在反式剪接引导序列SL1,全长2 517 bp,包含一个1 836 bp的开放阅读框;在推导出的611个氨基酸残基的前体蛋白中,N端的前21个氨基酸残基为信号肽,C-28的位置存在糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定位点,除比之外的562个氨基酸残基是成熟的乙酰胆碱酯酶序列,其预测的分子量为64 396.81 D.在一级结构中,形成催化活性中心的3个氨基酸残基(Ser232、Glu360和His479),以及在亚基内形成二硫键的6个半胱氨酸完全保守;在电鳐乙酰胆碱酯酶分子的催化功能域中存在14个保守的芳香族氨基酸残基,其中12个在甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶中完全保守.该酶的氨基酸序列与秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)ACE-3和ACE-4的同源性达56.1%和50.0%.与其它线虫和物种乙酰胆碱酯酶的聚类分析显示,甘薯茎线虫的乙酰胆碱酯酶与III型乙酰胆碱酯酶ACE-3同属一个支系.