甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶基因Dd-ace-2全长cDNA的克隆和序列分析

摘要

利用 RT-PCR,RACE 技术克隆了甘薯茎线虫(Ditylenchus destructor)乙酰胆碱酯酶基因(Dd-ace-2) cDNA(GenBank 登录号 EF583058),用 DNAMAN5.0、MEGA3.0 进行了序列分析.克隆的 Dd-ace-2 基因 cDNA 全长 2425 bp,包含一个 2205 bp 的开放阅读框,编码 734 个氨基酸.Dd-ace-2 基因推导的氨基酸序列与南方根结线虫(Meloidogyneincognita)、秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)和动物寄生线虫胎生网尾线虫(Dictyocaulus viviparous)ace-2 的氨基酸序列同源性分别达 48.0%、42.7%和 42.1%.在推导的 734 个氨基酸残基的前体蛋白中,前面的701个氨基酸残基是成熟的乙酰胆碱酯酶序列,其预测的分子量为 79240.38 D.在一级结构中,形成催化活性中心的 3 个氨基酸残基(Ser291,Glu442 和 His574)、胆碱结合位点 Trp(177),以及在亚基内形成二硫键的 6 个半胱氨酸完全保守;在电鳐乙酰胆碱酯酶分子的催化功能域中存在14个保守的芳香族氨基酸残基,其中10个在甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶中完全保守.与其它线虫和物种乙酰胆碱酯酶的聚类分析显示,甘薯茎线虫的乙酰胆碱酯酶与其它线虫乙酰胆碱酯酶 ACE-2同属一个支系.