过表达UHRF1通过调控ROS/Rb/p16INK4A信号通路保护氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞凋亡

摘要

目的 本研究旨在探讨 UHRF1 调节晶状体上皮细胞抗氧化、抗凋亡的能力以及其潜在分子机制.方法 应用实时定量 PCR 检测白内障体内体外模型中 UHRF1 的表达;将不同浓度的 H2 O2 分别加入人晶状体上皮细胞中,通过 CCK-8 检测 H2 O2 对于晶状体细胞的凋亡影响.通过活性氧试剂盒检测过表达 UHRF1 后,分析对于氧化应激诱导的 HLEC-3 细胞活性氧的影响.通过免疫蛋白印记方法检测氧化应激诱导的 HLEC-3 转染过表达 UHRF1后凋亡相关蛋白 Bax 、 Bcl-2 、 Rb 和 p16INK4A蛋白的变化, caspase-3 活性试剂盒检测预转染UHRF1 后由氧化应激( 1 0 0 μmol/L ,1 2 h )诱导 HLEC-3 细胞中 Caspase-3 活性变化.结果白内障患者前囊膜以及体外模型中,UHRF1 的表达有显著降低( P =0. 032).过表达 UHRF1后能够明显逆转由氧化应激诱导的 HLEC-3 细胞活性降低以及细胞内活性因子 SOD 以及GSH-Px 降低,以及 ROS 与 MDA 表达升高.而过表达 UHRF1 3 6 h 后, H2 O2 ( 1 0 0 μmol/L )刺激1 2 h ,蛋白印迹结果显示相对于正常对照组, UHRF1 组中 Bax 、 PCNA 蛋白表达明显升高,而Bcl-2 表达明显降低. Caspase-3 活性相对于对照组,实验组也明显升高( P =0 . 0 2 1 ) .此外,相对于对照组,Rb (P =0. 041)以及 p16INK4A(P =0. 038)蛋白在过表达 UHRF1 组明显升高.结论 过表达 UHRF1 通过抑制 ROS/Rb/p16INK4A通路逆转由氧化应激诱导的 HLECs 的细胞凋亡. UHRF1 将来可能成为一种治疗白内障潜在治疗靶点.