去甲斑蝥素诱导黑色素瘤M14细胞凋亡及相关机制的研究

摘要

cqvip:目的探讨去甲斑蝥素对人黑色素瘤M14细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用CCK8法检测不同浓度去甲斑蝥素对黑素瘤M14细胞增殖的影响。实时荧光半定量PCR(RT-PCR)方法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Capase-9、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、细胞色素c基因的mRNA的表达,以2’,7’-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)为荧光探针检测不同浓度去甲斑蝥素对细胞内活性氧(ROS)产生的影响,双重加热测定法检测对细胞内丙二醛(MDA)水平的影响。结果CCK8实验显示去甲斑蝥素抑制黑色素瘤M14细胞增殖并诱导其凋亡,呈浓度依赖性。RT-PCR结果显示去甲斑蝥素可诱导M14细胞内凋亡相关基因Caspase-3、Capase-9、Bax、细胞色素c的mRNA表达(P<0.05),并降低凋亡抑制基因Bcl-2的mRNA表达(P<0.05)。荧光探针检测结果显示去甲斑蝥素可刺激细胞内ROS的产生,双重加热法检测结果显示去甲斑蝥素可诱导细胞内丙二醛(MDA)的升高(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论去甲斑蝥素通过诱导人黑色素瘤M14细胞凋亡从而抑制其生长,其作用机制可能与激活促凋亡基因Caspase-3、Capase-9、Bax、细胞色素c,抑制抗凋亡基因Bcl-2,并诱发细胞内高ROS有关。