产黄青霉抗真菌几丁质酶的纯化及特性分析

摘要

为实现抗真菌性能的耐热新型几丁质酶在食品防腐及生物防治方面的应用,从产黄青霉Xch23中分离纯化几丁质酶(Chi-Pc76)并研究其应用特性.通过硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose A52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析纯化得到均一的Chi-Pc76.最终得到Chi-Pc76纯化倍数17.1倍,回收率21.6％,比活力为584.8 U/mg.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得Chi-Pc76分子质量61 kDa.纯化后的Chi-Pc76最佳反应条件为pH 6.0、温度55°C.Chi-Pc76在宽泛的pH 4.0～10.0之间稳定性强,其显著的热稳定性可达到70°C.Chi-Pc76对底物胶体几丁质具有高的底物特异性,对乙二醇几丁质、α-几丁质、β-几丁质有中等活性,而对其他受试底物无活性或痕量活性.以胶体几丁质为底物Km和Vmax值分别为0.25 mg/mL和20 μmol/ (min·mg).金属离子Ca2+、Ba2+、K+、Na+对酶有明显激活作用;十二烷基硫酸钠、吐温80、苯甲基磺酰氟和尿素对酶活力基本无影响,但Mn2+、C02+、Fe2+、Ag+、Cu2+、Zn2+、pb2+、Hg2+和β-巯基乙醇、二硫苏糖醇均对酶活力有抑制作用.Chi-Pc76对黑曲霉、黄曲霉、尖孢镰刀菌和橘青霉均有显著的抗真菌活性,对比文献为产黄青霉抗真菌几丁质酶.鉴于Chi-Pc76纯化简便、热稳定性好、宽广的pH值稳定性、高效降解几丁质和抗真菌等特点,产黄青霉Xch23几丁质酶在几丁质废料综合利用、生物转化药理活性产品、食品保鲜以及植物病原性真菌和昆虫幼虫生物防治等方面具有潜在价值.