沙门氏菌属随机扩增多态性DNA PCR条件的优化

摘要

目的:以5'-CCGAAGCTGC-3'为引物,利用随机引物扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对沙门氏菌属的几种菌株进行扩增,以确定RAPD的最终优化条件.方法:首先选用25μl体系PCR和50μl体系PCR做对比,以确定进行RAPD实验最佳的PCR体系.其次进行PCR反应体系条件的优化,刘PCR复性温度、引物浓度、Mg~(2+)浓度进行条件优化.最后对初步确定的优化结果进行不同琼脂糖胶浓度梯度的优化以确定RAPD的最终优化条件.结果:RAPD优化条件为PCR复性32℃,25mmol/L Mg~(2+)溶液体积2.0μl,10μmol/L引物体积0.2μl,琼脂糖胶浓度1.0%.结论:在优化条件下,以引物5'-CCGAAGCTGC-3'对沙门氏菌属的3种标准菌株,9株食品分离株进行扩增,得到的电泳条带最多,且最清晰.