多年生黑麦草成熟胚再生体系的建立及基因枪转化

摘要

目的 :建立以多年生黑麦草成熟胚为起始材料的再生体系 ,用于基因枪转化。方法 :多年生黑麦草成熟种子在附加 5mg L 2 ,4 D的MS培养基上诱导愈伤组织 ,转至新继代培养基上产生胚性愈伤组织。分化培养基为无激素MS培养基。再生植株在培养基成分减半的无激素MS培养基生根 ,之后移栽至土壤。基于这一再生体系 ,用含有水稻几丁质酶基因RC2 4的质粒pARN6和含有草丁膦乙酰转移酶基因Bar的质粒pDB1 ,通过基因枪轰击胚性愈伤组织。用附加PPT的继代培养基进行转化植株的抗性筛选。结果 :共获得 2 4 3株再生植株。通过PCR进行检测 ,获得1 8株整合有RC2 4基因的植株 ,1 5株整合有Bar基因的植株 ,同时转入 2个基因的植株 2株。