Мы использовали технологию переноса генов для усовершенствования растений райграса многолетнего (Luliiim perenne L.). достигнув эффективной регенерации и успешной агробактериальной трансформации геном bar, кодирующим фосфинотрицнн ацетилтрансферазу. Для оптимизации условий регенерации мы сравнили действие различных комбинаций четырех регуляторов роста на интактные семена шести сортов газонного райграса, источника зрелых зародышей. Все семена могли образовывать каллус и регенерировать новые растения. Самую высокую частоту каллусообра-зования наблюдали при культивировании семян на МС-среде. содержавшей 9 мг/л 2,4-Д и не содержавшей Б АП. Лучше всего образовывался каллус на семенах сорта TopGun (в 96% случаев) частота регенерации также была наивысшей у этого сорта (48.9%). При оптимальных для регенерации условиях эмбриогенные каллусы трансформировали штаммом LBA4404 Agrobacterium. содержавшим плазмиду рСАМВ1А3301. После отбора потенциально трансформированных каллусов мы получили 22 регенерированных трансгенных растения, устойчивых к гербициду фосфинотрицину. Трансген-ность ряда регенерантов была подтвержденаполимеразной цепной реакцией, гибридизацией по Са-узерну и экспрессией GUS. Два испытанных трансгенных растения обнаружили устойчивость кгербициду. Мы показали, что эмбриогенные каллусы, образовавшиеся из зрелых семян, можно прямо использовать для эффективной регенерации райграса многолетнего и его трансформации, и этот протокол можно применять для генно-инженерного получения растений, устойчивых к гербицидам.
展开▼
