应用农杆菌介导GUS基因优化多年生黑麦草转化体系的研究

摘要

本文通过检测愈伤组织中GUS基因的瞬间表达,研究了农杆菌LBA4404/pCAMBIA1301介导多年生黑麦草的转化体系.通过对多年生黑麦草瞬间表达率的比较,确立了其遗传转化的最佳优化条件.研究发现,在多年生黑麦草不同品种的转化率在25-45﹪之间变化.多年生黑麦草遗传转化最佳优化条件是预培养10d的胚性愈伤组织、浓度为0.5-0.8OD的农杆菌菌液以及2d共培养时间.在共培养基中添加100μmol/L乙酰丁香酮能有效地提高植物瞬间表达率.两种侵染处理方法比较结果为滤纸滴加法比浸泡法更优.转化后对愈伤的干燥处理能抑制农杆菌过度繁殖,能改善愈伤状态,有利于提高转化率。