基于线粒体ND6基因检测犬感染细粒棘球绦虫的粪便PCR方法

摘要

目的 旨在了解动物包虫病流行区内犬细粒棘球绦虫的感染情况.方法 本研究利用Qiagen DNeasy Powersoil试剂盒对犬粪提取DNA,并从细粒棘球绦虫线粒体全基因组中筛选出完整线粒体ND6基因作为靶基因,建立一种可对犬粪中细粒棘球绦虫同时进行检测及基因分型的PCR方法.结果 该法特异性很高,仅能扩增出细粒棘球绦虫的目的条带而对照组均无条带扩增.其灵敏度达到4 pg的DNA含量.当犬人工感染约50 000只原头蚴时,该法最早可以扩增出感染第13d粪便中的ND6目的基因.同时,对40份随机采自包虫病流行区的待检犬粪进行PCR检测,共有6份样品可扩增出目的条带且其基因型均属G1型,其检测及分型结果均与经典基因分型依据(COX1基因片段)的结果一致.结论 本研究建立的粪便PCR方法具有很高的特异性和灵敏度,并可用于检测犬的细粒棘球绦虫早期感染情况.对于PCR检测阳性者,其产物经测序分析后也可用于细粒棘球绦虫的基因分型及种群遗传结构的分析研究.