贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白基因的克隆与表达

摘要

目的克隆和表达贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)27kDa外膜蛋白基因(com1).方法采用PCR方法,从质粒pGEM-T/com1扩增出Com1基因片段,经鉴定后,将其克隆于原核表达载体pQE30,构建成重组质粒pQE30/com1,IPTG诱导表达.结果(1)获得长约760bp的PCR片段,序列分析结果与已知com1序列相同.(2)SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量27kDa处有表达条带.经薄层扫描分析,目的蛋白条带占全菌体蛋白的17.2%.(3)经分析,有较好的抗原性.(4)表达菌体超声破碎后,目的蛋白主要存在于包涵体中.结论贝氏柯克斯体com1基因在大肠杆菌中获得了高效表达,所表达的重组蛋白能与Q热抗体发生反应.