弓形虫微线体分泌蛋白TgMIC10基因的克隆、表达及鉴定

摘要

目的 克隆、表达及鉴定弓形虫(RH株)微线体分泌蛋白TgMIC10编码基因,为建立一种灵敏检测弓形虫感染的实验方法作准备.方法 提取弓形虫速殖子总RNA,设计并合成引物,RT-PCR扩增TgMIC10编码基因,与克隆载体pGEM -T连接,经酶切和PCR鉴定及DNA测序证实后,亚克隆入表达载体pBK-CMV,IPTG诱导表达pBK-TgMIC10阳性重组子转化宿主菌E.coli BL21,Western blot 鉴定.结果 PCR法扩增出了一597bp左右的DNA片断,将重组质粒pGEM-TgMIC10、pBK-TgMIC10分别作EcoR I和Xba I 双酶切,均能得到一个大小与PCR 扩增产物一致的插入片断,表明TgMIC10基因的克隆和亚克隆均获成功,用IPTG诱导带有重组质粒pBK-TgMIC10的大肠杆菌,产物行SDS-PAGE,可得到一约21kDa 融合蛋白,Western-blot 法鉴定该蛋白能被弓形虫感染的兔血清所识别.