弓形虫微线体蛋白TgMIC10基因的克隆、表达及鉴定

摘要

目的:从弓形虫RH株cDNA中扩增出微线体分泌蛋白TgMIC10编码基因,亚克隆至真核表达载体,利用所得的重组蛋白,为建立一种灵敏检测弓形虫感染的实验方法作准备.方法:提取弓形虫速殖子总RNA,设计并合成引物,RT-PCR扩增TgMIC10编码基因,通过与线性克隆载体pGEM-T连接,经酶切和PCR鉴定及DNA测序证实后,将目的基因亚克隆入双表达载体pBK-CMV,将获得的pBK-CMV-TgMIC10阳性重组子转化宿主菌E.coli BL21,IPTG诱导表达,Westernblot鉴定.结果:PCR法扩增出了一597bp左右的DNA片断,将重组质粒pGEM-T-TgMIC10、pBK-CMV-TgMIC10分别作EcoR I和Xba I双酶切,均能得到一个大小与PCR扩增产物一致的插入片断,对插入片断的测序结果表明,TgMIC10具有一个长度为597bp的完整开放阅读框(ORF),编码198个氨基酸,理论分子量23kDa,与GenBank收录(编号为AF293654)的弓形虫TgMIC10基因具有高度的同源性(99.5％).表明TgMIC10基因的克隆和亚克隆均获成功,用IPTG诱导带有重组质粒pBK-CMV-TgMIC10的大肠杆菌,产物行SDS-PAGE,可得到一约21kDa融合蛋白,Western-blot法鉴定该蛋白能被弓形虫感染的兔血清所识别.

目录

中英文词对照表

前言

2材料与方法

3实验结果

四讨论

5结论

6参考文献

附录一

附录二：个人简介

附录三：致谢

综述 弓形虫与妊娠期感染