弓形虫致密颗粒蛋白GRA6基因的克隆表达、纯化及鉴定

摘要

目的:构建弓形虫致密颗粒蛋白6(GRA6)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达.rn 方法:根据GRA6基因序列设计合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA6基因片段,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经酶切、PCR鉴定并测序;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析并纯化,Western blot分析其反应原性.rn 结果:GRA6基因PCR产物大小约为693 bp,与预期相符;重组质粒经酶切及PCR鉴定构建成功,测序结果与已知序列吻合;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA6融合蛋白分子质量单位约为52ku,该蛋白可被GST标签抗体识别.rn 结论:成功重组了弓形虫GRA6基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础.