稻瘟病菌T-DNA插入突变体库构建及致病相关突变体筛选

摘要

利用农杆菌T-DNA介导的遗传转化体系转化稻瘟病菌(Magnaportht grisea)Y34菌株,平均每转化1.0×106个稻瘟病菌分生孢子可得到约300个抗潮霉素菌株.用该转化体系转化和筛选,获得抗潮霉素菌株6 855个.PCR检测结果表明,所有表现抗潮霉素菌株均含抗潮霉素基因,说明抗潮霉素特性是T-DNA携带潮霉素基因插入Y34基因组的表型效应,即抗潮霉素菌株是T-DNA插入突变体.对56个突变体DNASouthern检测结果表明,有27个突变体是单拷贝插入,突变体T-DNA插入拷贝数平均为1.43.随机取1 600个突变体进行致病力测定,结果发现23个突变体完全丧失致病能力.