人胎盘间充质干细胞来源外泌体保护氧化应激损伤肺上皮细胞的机制

摘要

背景:前期研究已证实人胎盘间充质干细胞来源培养上清能够通过抑制细胞凋亡保护氧化损伤的肺上皮细胞.目的:探究人胎盘间充质干细胞来源外泌体对氧化应激损伤肺上皮细胞BEAS-2B的保护作用.方法:体外培养BEAS-2B细胞,采用含100,200,300,400,500 μmol/L过氧化氢的DME/F-12完全培养基培养细胞4h,以及用含300 μmol/L过氧化氢的DME/F-12完全培养基分别培养细胞2,4,6h,CCK-8法测定细胞存活率,以确定过氧化氢氧化损伤模型条件.Hoechst33258染色观察细胞凋亡情况,q-PCR及Western blot检测bax、bcl-2基因和蛋白的表达以确定模型的有效性.收集第3代人胎盘间充质干细胞培养上清,按照外泌体提取试剂盒说明进行外泌体提取,将外泌体作用于氧化损伤的BEAS-2B细胞,q-PCR及Western blot检测bax、bcl-2、nrf2及keap1的表达.结果 与结论:①采用300 μmol/L过氧化氢作用于BEAS-2B细胞4h,细胞存活率为(51.96±2.17)％,可作为氧化损伤模型的最适条件,且Hoechst33258染色、q-PCR及Western blot证明模型有效;②与损伤组比较,外泌体组bax表达降低而bcl-2表达升高,nrf2表达升高而keap1表达降低,差异有显著性意义(P＜0.05);③结果提示,人胎盘间充质干细胞来源外泌体能够抑制氧化损伤BEAS-2B细胞凋亡,其作用机制可能与激活Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关.