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华北地区第十七届职业卫生学术交流会

召开年：2006
召开地：北京
出版时间： 2006-11

主办单位：;华北地区职业卫生协作组;;

会议文集：华北地区第十七届职业卫生学术交流会论文集

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1.ERK-1/2在移植静脉再狭窄中的作用
- 高涌;焦学飞
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：内膜增生是自体静脉在心脏和外周血管转流手术后血管长期通畅的主要障碍。尽管静脉移植是冠脉转流手术最常用的方法，但是他们的成功率受高发的后期狭窄和最终管腔阻塞限制。血管转流手术可以导致MAPKs的活化。MAPKs主要包括3个亚族：ERK-1/2，JNK及P-38，它们主要与细胞增殖、迁移和凋亡有关，在本文中，笔者应用大白兔制作颈动脉转流模型，分析了ERK-1/2活化在移植静脉中的作用。
2.兔骨髓间充质干细胞诱导成类视网膜色素上皮细胞后吞噬功能的检测
- 洪晶
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：视网膜色素上皮细胞(Retinal Pigment Epithelium，RPE)吞噬功能对视觉功能的维持至关重要。吞噬功能障碍会导致严重的视网膜疾病，如年龄相关性黄斑变性。干细胞诱导成类RPE细胞可能成为RPE细胞移植治疗的细胞来源。本研究采用兔骨髓间充质干细胞(mesenelaymal stem cell，MSCs)通过条件培养液诱导的方式，诱导兔MSCs向RPE细胞分化，并观察分化细胞的特异性(ROS)及非特异性(LB)吞噬功能，为治疗视网膜疾病提供细胞奠定基础。
3.骨髓基质干细胞移植治疗肢体淋巴水肿的研究
- 金星;侯传强;吴学君
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：研究BMSCs移植对继发性肢体淋巴水肿的治疗，明确BMSCs移植治疗肢体淋巴水肿的疗效和影响疗效的因素，探索肢体淋巴水肿治疗的新方法。
4.干细胞技术临床应用规范化管理的思考
- 严整辉;孙鲁申
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：本文探讨了政府给予指导和规范化管理对于解决好干细胞技术在临床应用中的规范化管理的重要性，分析了BOX系统的特点和优势，并讨论了BIOMARKET ROX(再生医学细胞治疗操作系统)的结构组成和性能特点。
5.基因芯片技术筛选不同发育阶段人表皮干细胞差异表达基因的研究
- 蓝蔚;刘德伍;毛远桂
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：利用基因芯片技术筛选不同发育阶段人表皮干细胞差异表达基因，分析不同发育阶段人表皮干细胞基因表达变化的特征及其可能的生物学意义，为进一步探讨表皮干细胞增殖分化调控机制提供新思路和线索。
6.干细胞移植在血管性疾病中的治疗作用
- 韩忠朝
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：血管疾病治疗仍依赖各类药物融栓和扩张血管，这并不能阻断病程的发展，往往最后不得不施行血管再通或旁路搭桥手术，但这类手术的应用受到一定的限制。而外周血管栓塞性疾病如血栓闭塞性脉管炎，还有动脉硬化性闭塞症则由于缺乏有效治疗方法，许多使病人不得不接受截肢。随着对缺血性疾病的病理生理过程研究的深入，发现促进原已存在的代偿性血管重建是富有前景的治疗新策略。本文下面结合本院的具体实践，探讨了血管性疾病治疗中应用干细胞移植的优势和效果，并阐述了治疗技术发展的方向。
7.猪血源纤维蛋白胶过敏、局部刺激及溶血研究
- 姜华;戴祖瑞;宗洪海;王艳菊;高述祥;符伟国;陆国才;何红兵
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：本文结合豚鼠主动全身过敏试验和大鼠被动皮肤过敏试验分析了猪血源纤维蛋白胶的致过敏性，然后又结合连续腹腔注射对大鼠局部刺激性试验和腹腔注射对Beagle犬局部刺激性试验分析了猪血源纤维蛋白胶的刺激性，最后结合溶血试验观察了猪血源纤维蛋白胶有无溶血现象和红细胞凝聚现象。
8.猪血源纤维蛋白动物药代动力学研究
- 谢瑛;钟高仁;宗洪海;王艳菊;高述祥;杨莉;符伟国;范国荣;何红兵
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：我国独创的动物源纤维蛋白胶是由适当比例的猪血源纤维蛋白原、凝血酶等所组成。各组分均匀混合后，形成乳白色纤维蛋白凝胶。该凝胶作为局部止血材料在我国外科临床应用了10余年，100余万例患者使用本了该产品，至今无严重不良反应。近年来，纤维蛋白作为组织工程血管的支架材料越来越受到人们的重视。但是有关猪血源纤维蛋白在体内的吸收、分布和排泄情况，未见报道。本研究采用放射性核素125I示踪技术和TCA沉淀法研究猪血源纤维蛋白在SD大鼠体内的药代动力学，以及在SD大鼠体内的组织分布和排泄特征。采用荧光素FITC标记法研究猪血源纤维蛋白在Beagle犬体内的药代动力学。
9.NRSF与小鼠胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的研究
- 庞希宁;李宏图;张涛;刘晓玉
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：神经限制性沉默因子(NRSF)是一种锌指蛋白转录因子，能与神经元终末分化基因启动子区域的神经限制性沉默元件(NRSE/RE-1)序列结合，从而在转录水平抑制许多与神经元发育及功能相关基因的表达。本文用改良的“序贯诱导法”在体外将胚胎干细胞诱导分化为神经细胞。通过基因表达芯片检测诱导分化前后含有NRSE/RE-1序列基因，用实时定量PCR进行验证。将化学合成的RE-1/NRSE dsRNA转染小鼠胚胎干细胞(mESCs )，进一步证实其在mESCs向神经细胞分化中的诱导作用。研究结果表明：在mESCs诱导分化为神经细胞过程中，基因表达芯片筛选出11种与促进神经元发育相关的含有NRSE/RE-1序列基因，即P2ry12，Nptxr，Syp，BDNF，Syt2，Syt7，Ntrk3，Cdh4，Atp262，Rgs7，Cacna2d3。
10.自体外周血干细胞移植(介入)治疗糖尿病足临床研究
- 于华峰;赵荣;马云辉;何亚男;刘琰
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：旨在观察自体外周血干细胞移植(介入)治疗糖尿病足临床疗效。方法：利用自体外周血干细胞动脉腔内联合缺血部位肌肉移植治疗糖尿病足。结果：血管照影显示：有明显的侧支血管生成，所有患肢疼痈和冷感觉改善率100％。间歇件跛行缓解率87％，行走间距延长率76％，溃疡愈合率78％，坏疽好转率74％，ABI改善率78.2％。结论：该项技术可促进糖尿病足病人下肢缺血部位重建有效侧支血管，是行之有效的治疗方法，尤其是对没有流出道患者更具特殊意义，免除或降低截肢平面，改善病人生活、提高病人生命质量。
11.猪血源纤维蛋白胶急性毒性研究
- 姜华;戴祖瑞;宗洪海;王艳菊;高述祥;符伟国;陆国才;何红兵
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：(一)猪血源纤维蛋白胶腹腔注射对小鼠的急性毒性试验：实验观察了腹腔注射猪血源纤维蛋白胶对小鼠的急性毒性，观察期14天。小鼠给予猪血源纤维蛋白胶后，未见明显的不良反应。给药后第1天小鼠体重略有下降，第7天及第14天动物体重均有增加。受试小鼠于实验期内无一死亡。第14天存活小鼠处死后，解剖经肉眼观察发现，小鼠体内有未被吸收的残留药物，其它未见明显异常。结果表明腹腔注射猪血源纤维蛋白胶对小鼠的MTD>5735 mg/kg。 (二)猪血源纤维蛋白胶腹腔注射对大鼠的急性毒性试验：实验观察了猪血源纤维蛋白胶腹腔注射对大鼠的急性毒性，观察期14天。大鼠腹腔给予猪血源纤维蛋白胶后，未见明显的不良反应。给药后第1天雌性大鼠体重略有下降，雄性大鼠体重略有增加，第7天及第14天动物体重均有增加。受试大鼠于实验期内无一死亡。第14天存活大鼠处死后，解剖经肉眼观察未发现明显异常，动物体内无残留药物。结果表明腹腔注射猪血源纤维蛋白胶对大鼠的MTD>1720.5 mg/kg。
12.bFGF和G-CSF促进兔缺血后肢血管新生的实验研究
- 王志伟;党晓卫;马秀现
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：本文通过皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)促使兔骨髓干细胞动员；在兔骨髓干细胞动员促使”干细胞自我移植”的基础上，兔缺血后肢肌内注射重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)，观察其对缺血组织血管新生情况的影响及兔缺血肢体的改善情况。
13.组织工程医疗产品的标准化研究进展
- 王春仁
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：本文介绍了我国组织工程医疗产品标准化研究以及管理方面的最新进展。我国的组织工程在国家的大力支持下在基础研究方面取得的很大的成绩，研究的重点主要是组织工程皮肤、软骨、骨、肌腱、角膜、血管、微囊化细胞等。目前西安第四军医大学组织工程研究中心研究的组织工程皮肤最为显著，已经获得国家食品药品监督管理局医疗器械产品注册证，其他的组织工程医疗产品尚处于研发和临床前研究阶段。组织工程质量标准研究主要从种子细胞、材料支架和组织工程产品三个方面进行控制。在组织工程质量标准制定方面完成了8个组织工程医疗产品的相关标准，其他多个标准正在起草研究中，标准的研究为组织工程的产业化发展起到了很好的作用，也为组织工程的管理提供了技术支持。
14.肝硬化的干细胞治疗
- 郭晓钟
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：笔者的研究采用患者自体骨髓源性干细胞作为供体，体外分离后纯化经肝动脉途径移植入患者肝内，使干细胞在肝脏中分化生长为具有功能的肝细胞，使肝硬化患者的肝功能得到效果明显的恢复和重建，至今达190余例，取得了良好的临床效果。本文现将干细胞提取和移植的方法、干细胞移植后的各项指标显示以及干细胞治疗的结果进行了总结报告。
15.自体干细胞治疗神经损伤的技术方法及临床疗效的探讨
- 靳艳华;王德辉;姜英
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：通过自体干细胞分离提纯技术，增加各种干细胞有效性是治疗损伤性疾病的关键，观察自体干细胞临床应用的疗效。方法：采用负收集混合法以表面抗原Lin阳性细胞为靶细胞，分离除去全部的红细胞、血小板、血浆物质，保留所有的Lin阴性的工细胞/祖细胞的方法。能有效保留所有的干细胞/祖细胞，而细胞的表面没有任何抗体标记，不仔在生物安全性问题。结果：30例脊髓神经损伤性患者，经干细胞/祖细胞治疗并完成36次治疗出院后随访，12例患者有感觉平面下降，10例患者有不同程度的肌力恢复，从原来卧床到治疗后改变能在辅助器具帮助下可以站立、行走。8例患者由过去不能自觉排便到治疗后出现二便有感觉或可以自主排二便。移植术后8周差异最为明显，效果均显著优于术后4周(P<0.05)。结论：自体干细胞移植对脊髓神经损伤性疾病具有一定疗效，方法可靠，疗效稳定，是继药物治疗、手术治疗、物理治疗之后又一新的治疗技术的跨越，值得进一步推广应用。
16.外周血单个核细胞移植对糖尿病大鼠缺血后肢氧化应激的影响
- 岳琳;王富军
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：观察外周血单个核细胞移植对糖尿病大鼠缺血后肢的治疗效应和对移植后其氧化应激的影响。方法：将30只Sprague-Dawlay(SD)大鼠以空腹12小时后给予腹腔注射65mg/kg链脲佐菌素(Streptozocin，STZ)(溶于新配制的0.1mol/L，PH4.2柠檬酸钠缓冲液中)，以诱发1型糖尿病，另外10只作为正常组(N)，仅注射同样体积的磷酸盐缓冲液，造成糖尿病模型后结扎30只糖尿病大鼠左后肢股动脉及其分支建立糖尿病后肢缺血模型，其间死亡2只大鼠，将剩余的大鼠随机分为两组，其中14只行外周血单个核细胞移植为移植组(T)；其余14只为缺血组(L)，4周后通过用免疫组化方法检测缺血区毛细血管密度观察外周血单个核细胞移植对糖占尿病大鼠缺血后肢的治疗效应；通过用比色法检测血清中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性、丙二醛(MDA)水平观察外周血单个核细胞移植对氧化应激的影响。结果：移植组后肢缺血改善较好，毛细血管密度较缺血组多；与缺血组相比移植能降低血中MDA水平；提高血中SOD水平。结论：移植外周血单个核细胞对糖尿病大鼠后肢缺血可能有治疗效应。
17.自体干细胞移植治疗糖尿病下肢缺血的研究进展
- 岳琳;王富军
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：随着人们生活水平的不断提高，糖尿病的发病率在快速增长，由此所致的糖尿病足的发生率也越来越高。糖尿病足的传统治疗主要足内科的药物治疗和外科的血流重建，药物治疗不能从根本上解决问题，外科血流重建应当是首先考虑的方法，但由于糖尿病下肢血管病变多缺乏远端动脉流出道，故无法接受动脉搭桥或血管介入，而自体干细胞移植可促进局部血管再生达到治疗下肢缺血的目的，近年成为研究热点。
18.骨髓动员刺激后的自体骨髓血干细胞移植治疗糖尿病下肢血管病变的围手术期护理
- 高素文;崔凤勤;檀增桓;何立明;杨力
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：探讨自体骨髓血干细胞移植治疗糖尿病下肢血管病变围手术期的护理方法与疗效。方法：在首先做好病人心理护理的基础上，做好自体骨髓血干细胞采集及干细胞移植术的全程护理，严密监测病人手术前后及手术程中的病情变化，采取积极有效措施，预防并发症的发生。结果：本组病例在自体干细胞移植治疗术前，术后及手术程中未发现任何并发症及不良反应。术后观察所有患肢麻木、冷凉、疼痛均有不同程度缓解，行走间距延长，间歇性跛行好转，溃疡愈合，坏疽好转，截肢率下降，踝肱动脉指数(ABI)改善，取得满意临床效果。结论：自体骨髓血干细胞移植治疗远端流出道狭窄的糖尿病下肢血管病变，方法简便，不发生免疫反应，安全，有效。围手术期的全程规范化护理为移植成功提供了可靠的保证。
19.猪血源纤维蛋白胶动物长期毒性研究
- 姜华;戴祖瑞;宗洪海;王艳菊;杨莉;符伟国;陆国才;何红兵
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：本文结合腹腔注射对大鼠长期毒性试验和Beagle犬长期毒性试验，分别观察了大鼠和Beagle犬连续腹腔注射(ip)猪血源纤维蛋白胶15天的毒性反应，以及停药30天的恢复情况。
20.TGF-β1 VEGF体外诱导胚胎干细胞为血管内皮细胞
- 熊吉信;刘小春;刘兆轩;杨春江
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：研究胚胎干细胞在体外不同条件下定向诱导分化血管内皮细胞的能力。方法：实验分三组：转化生长因子β1(TGF-β1)诱导组、血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导组、TGF-β1与VEGF共诱导组。结果：经2周左右的诱导后，三组均能诱导胚胎干细胞为内皮细胞，拟胚体(embryonic body)周边形成血管样结构，共诱导组形成血管样结构的拟胚体数最多。结论：TGF-β1与VEGF均能诱导胚胎干细胞为内皮细胞，但两者合用可提高诱导的效率。
21.抗凝的PCL组织工程人工血管支架的制备和表征
- 叶霖;武欣;耿雪;段红永;谷涌泉;张建;冯增国
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：随着心血管疾病越来越成为现代社会人类健康的主要威胁，有关可替代自体血管的人工血管的研究越来越引起学界的重视。以PTFE，涤纶和聚氨酯为代表的大口径人工血管早已进入临床并取得了极大的成功，但小口径(直径小于6mm)人工血管却一直受困于其难以令人满意的通畅率而无法进入临床应用。组织工程作为材料学和医学的交叉学科，被认为是最有单解决小口径人工血管研制难题的一项新技术。如采用体内“组织工程”的方式研制小口径人工血管，则植入初期血管内的凝血现象则成为导致人工血管产生血栓不通畅的主要原因，因此，本文旨在构建具有抗凝血性能的小口径人工血管支架来确保移植后的通畅率。
22.小鼠胚胎干细胞体外定向分化为血管平滑肌细胞的实验研究
- 刘兆轩;熊吉信
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：探讨体外定向诱导小鼠胚胎干细胞向血管平滑肌细胞分化的条件，为血管组织工程提供种子细胞。方法：用条件培养基体外培养小鼠胚胎干细胞，构建拟胚体分化模型。用10-9moL/l维甲酸、3ng/ml转化生长因子β1以及20ng/ml血小板源性生长因子在不同时间段加入，进行诱导分化，同时设不加诱导剂的自发分化对照组。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)榆测血管平滑肌肌动蛋白和血管平滑肌肌球蛋白重链基因的表达，应用免疫组织化学和免疫荧光榆测血管平滑肌肌动蛋白的表达，验证细胞的性质。结果：胚胎干细胞在体外能自发形成拟胚体。经过分阶段联合诱导，拟胚体贴壁后球体略摊开，10d拟胚体的周围出现圆形细胞，14d拟胚体周围出现大量梭形细胞生长，21d细胞经过RT-PCR检测的血管平滑肌肌动蛋白为强阳性，28d细胞的总RNA含量降低；14d将拟胚体消化，细胞生长良好。可见血管平滑肌样细胞，经过免疫细胞化学和免疫荧光检测血管平滑肌肌动蛋白表达为阳性。结论：胚胎下细胞在特定的条件下可以分化为血管平滑肌细胞，分阶段联合诱导血管平滑肌细胞的纯度有所提高，随着这个问题的进一步解决，胚胎下细胞将有可能成为血管组织工程的种子细胞。
23.沙坦对兔颈动脉内膜损伤后血管重塑相关因子的动态变化的影响
- 高涌;张海军
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：动脉狭窄或闭塞疾病，随着介入手术经皮腔内血管成形术(VIA)的发展，介入治疗有其操作方便、病人恢复快的特点，但是内膜损伤越来越多，实施药物干预，并选择用药时间，预防动脉内膜再狭窄，防止血栓进一步形成成为了研究的重点。本文通过建立动脉内膜损伤来动态观察基质金属蛋白酶( MMPs)和金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)及生长因子TGF-β1等，了解该模型中各因子的变化规律，并用沙坦干预，指导用药的最佳时机。
24.小鼠胚胎干细胞饲养层的制备
- 熊吉信;刘小春;刘兆轩
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：探讨建立有效的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层，用于胚胎干细胞的培养。方法：取孕10.5～18.5天的昆明小鼠胚胎，用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞，在体外培养体系中，观察细胞在增殖，传代，冻存及复苏等方面的条件；取购自American Type Culture Collection(ATCC)小鼠胚胎成纤维细胞系制备饲养层，比较两种细胞用于制作饲养层在胚胎干细胞培养方面的优缺点。结果：12.5～14.5天的胎鼠最适合于制备饲养层，在37°C,0.25％胰酶-0.02％EDTA的混合消化液消化时间最好为3分钟，原代细胞平均培养4天即可传代，丝裂霉素-C抑制成纤维细胞增殖的合适浓度为10～20μg/ml。原代小鼠胚胎成纤维细胞较小鼠胚胎成纤维细胞系更适合于制备饲养层。结论：两种细胞均可用于制备饲养层。
25.干细胞移植治疗心血管疾病临床前研究及规范探讨
- 沈振亚
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目前国内的干细胞再生研究跟国际接轨，已发展到临床前研究阶段，为了规范干细胞技术的应用，2009年3月2日，卫生部颁布了《医疗技术临床应用管理办法》，将自体干细胞和免疫细胞治疗技术、异基因干细胞移植技术纳人第三类医疗技术管理。本文拟对目前骨髓干细胞移植临床前研究的几个热点问题进行概述，包括移植干细胞的种类、骨髓间充质千细胞的分离扩增与鉴定等，以对干细胞治疗心血管疾病的治疗规范进行探讨。
26.聚乳酸-聚己内酯与纤维蛋白原共混静电纺丝构建组织工程支架
- 董智慧;方征东;符伟国;张祥满;高斌;郭大乔;何红兵;王玉琦
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：以合成高分子材料聚乳酸-聚已内酯(PLCL)与天然生物材料纤维蛋白原为原料，利用静电纺丝技术构建具有良好细胞亲和力和机械性能的组织工程支架。方法：PLCL溶解于六氟异丙醇中得到浓度为8％的溶液，纤维蛋白原溶解于六氟异丙醇和10×DMEM混合溶液中(体积比9：1)得到100mg/ml的溶液。把PLCL溶液与纤维蛋白原溶液分别按4：1，2：1，1：1，1：2，1：4体积进行混合，利用静电纺丝技术构建组织工程支架。采用扫描电镜(SEM)检测支架的表面纤维形态，傅里叶全反射红外光谱(ATR-FITR)进行支架表面基团分析，X射线光电子能谱(XPS)对表面元素组成进行表征，并检测了支架的力学性能。WET-8试剂盒检测支架对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的粘附、增殖的影响，并以SEM观察HUVECs形态变化。结果：混纺支架纤维直径约240到450纳米，随着混纺液中纤维蛋白原浓度的增加，纤维直径逐渐降低。ATR-FITR及XPS证实混纺支架表面有纤维蛋白原氨基酸的存在。力学性能表明PLCL能够增加混纺支架的拉伸强度及最大伸长率，改善了纤维蛋白原的力学性能。细胞粘附增殖实验表明，疏水性的PLCL支架有更好的细胞粘附能力，但混纺支架有更好的细胞增殖能力。其中，体积比2：1的支架细胞增率最高。扫描电镜也证实在混纺支架表面，HUVECs生长良好，近乎铺满支架表面。结论：在4：1到1：1体积比范围内，以PLCL与纤维蛋白原共混后行静电纺丝。能构建具有良好力学性能及牛物活性的纳米组织工程支架。高分子合成材料PLCL能够作为支架的骨架提供良好的力学性能。天然材料纤维蛋白原增加了支架的生物活性。
27.利用脱细胞基质构建小口径组织工程血管的初步研究
- 武欣;汪忠镐;张建;谷涌泉;段红勇;陈兵;李建新;吴英锋;张淑文;孟艳
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：探讨利用异种脱细胞血管基质和间充质干细胞在体外构建小口径血管移植物。方法：采用犬骨髓中分离出间充质干细胞并体外培养扩增，诱导分化成内皮样细胞和平滑肌样细胞，并进行鉴定。采用胰蛋白酶和TrtitonX-100的方法对猪颈动脉血管进行脱细胞处理，并对脱细胞基质进行检测。延长胰酶处理时间.已获得良好的孔径和孔隙率。在生物反应器内采用旋转种植的方法将犬骨髓间充质干细胞诱导分化的内皮细胞种植到脱细胞基质上，完成小口径动脉的体外构建。结果：本研究采用将犬骨髓分离培养的MSCs为种子细胞，以猪脱细胞血管基质为支架，将MSCs旋转种植到脱细胞基质上，并在模拟血管的搏动性生物反应器内在剪切力的条件下培养，从而对初步构建小口径组织工程血管进行研究。结论：小口径血管移植物可以通过将间充质干细胞种植到异种脱细胞血管基质并在搏动性生物反应器内培养的方法进行构建可行性。
28.多孔脱细胞血管组织支架的初步研究
- 段红永;汪忠镐;谷涌铨;吴英锋;武欣;李建新;俞恒锡;陈兵;张淑文;张建
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：探讨使用多种化学试剂和蛋白酶对猪颈动脉进行脱细胞并制备多孔细胞外基质。方法：使用1％SDS进行脱细胞处理60h去除颈动脉中的细胞成分，然后使用0.25％胰蛋白酶、0.3U／ml胶原蛋白酶制备多孔基质。对于获得的基质进行H&E、Masson染色，评估脱细胞效果及基质的组织学特点，测定其孔径、孔隙率、力学强度及细胞毒性等。结果：1％的SDS可以很好的去除基质中的细胞成分，制作的多孔基质孔径明显增大，孔隙率高，基本无细胞毒性，力学强度尚可。结论：使用SDS及多种酶类可以制备出较为理想的多孔基质用于组织工程支架。
29.SHH诱导恒河猴MSCs分化为神经样细胞的实验研究
- 宋革;张阳;刘炳乾;郑炜炜;孙雪融
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：背景：骨髓间充质干细胞MSC诱导分化为神经细胞，是神经系统疾病细胞治疗的有效手段，但目前的时效尚不完善。目的：应用神经发育音猬因子(SHH)诱导恒河猴骨髓间质下细胞(MSCs)向神经样细胞分化。设计、时间及地点：观察对比试验，于2007-02/2008-06在中山大学眼科中心国家重点实验室完成。材料：1-2周龄恒河猴12只，胫骨粗隆抽取骨髓，诱导分化为神经样细胞。方法：密度梯度离心法分离培养恒河猴骨髓干细胞，倒置相差显微镜观察生长情况，MTT法测定细胞生长曲线，流式细胞仪鉴定细胞表型，免疫组化鉴定分化细胞标志，透射电镜和扫描电镜观察分化细胞超微结构。结果：体外分离培养的恒河猴骨髓MSCs，经流式细胞仪表型鉴定，且具有较高均一性。通过SHH诱导方案诱导处理7d后，分化细胞多数表现为NSE、NF-M、Tau和Nestin染色阳性，经图像统计分析发现经SHH诱导方案神经十细胞标志物Nestin阳性率显著高于RA诱导办案(p<0.01)，另一方面经RA诱导方案诱导的细胞表现GFAP阳性率高于SHH诱导方案，二者具有显著性差异(p<0.05)。结论：实验证实SHH诱导方案是一种诱导恒河猴MSC向神经样细胞分化的有效途径。
30.磁性纳米簇标记小鼠胚胎干细胞及其对细胞活力的影响
- 李金辉;张春富;程昌明;徐凤华;古宏晨;李海;汪铮
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：研究表面经两种不同电荷修饰的磁性纳米簇(ionic magnetic nanoclusters,IMNCs)标记小鼠胚胎干(mouse embryonic stem cell,mES)细胞可行性及对细胞活力的影响。比较两者的优劣性，确定两者的最佳标记浓度，为磁共振成像(MRI)技术追踪移植的磁标记胚胎干细胞奠定基础。方法：制备表面带正电荷(cationic magnetic nanoclusters，CMNCs)和负电荷(anionic magnetic nanoelusters，AMNCs)的磁性纳米簇，分别在体外对小鼠胚胎干细胞进行标记研究。采用Prussian blue染色、电镜观察鉴定两种磁性纳米簇标记ES细胞的效率；用7-AAD和CCK-8试剂盒分别检测标记后ES细胞的活力和增殖能力。结果：CMNCs细胞标记组铁浓度在0.03-0.09mmol/L及AMNCs细胞标记组铁浓度在0.3-0.9mmol/L时，Prussian blue染色可见90％以上细胞阳性。透射电镜町见铁颗粒位于胞浆中。CMNCs细胞标记组在低于0.3mmoL/L浓度标记后，对ES细胞的增殖能力与正常未标记组比较差异无统计学意义(P>0.01)，而 AMNCs细胞标记组在高于0.06mmol/L浓度标记时与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01). 结论：CMNCs在胚胎干细胞标记方面表现了优良的特性，优于AMNCs。标记培养基铁浓度在0.03-0.09mmol/L时，AMNCs对ES细胞标记效率高，且不影响其存活、增殖能力。为进一步利用核磁共振(MBI)对胚胎下细胞活体追踪奠定实验基础，磁性纳米簇在细胞生物学中具有重要的研究价值。
31.人骨髓间充质干细胞复合PLGA支架的体外灌流培养
- 王金福
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：本文目的是评价灌流培养条件下人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在聚乳酸-乙醇酸(PLGA)支架中的生长增殖情况。实验所用支架孔隙率为94.5％-98.0％，孔径大小为280-450μm。hMSCs接种密度为5×105个/支架，培养液流速是0.2mL/min。根据活细胞荧光染色和苏木素-伊红(H&E)染色的结果，细胞在支架中均匀分布和长。MTT法检测细胞力显示，在整个灌流堵养期间，细胞活力持续显著增加。DNA定量分析表明从接种到培养第11天细胞数量显著增加。扫描电镜(SEM)用来观察细胞在支架中的分布以及细胞外基质的分泌情况，结果显示，到第11天，细胞外基质已形成厚厚的一层将支架基本完全覆盖。以上结果表明，用该灌流生物反应器系统来进行hMSCs的三维立体培养和扩增足可行的，可以用于组织工程研究。
32.心梗后急性期干细胞移植联合抗炎治疗对心功能恢复的初步研究
- 劳伟杰
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：于心梗后急性期采用干细胞移植联合抗炎疗法，观察联合治疗后炎症因子水平变化、心功能状况及梗死后心肌形态学变化，并初步探讨其机理。方法：25只健康太湖梅山猪，明胶海绵栓塞冠状动脉(LAD)建立猪心肌梗死模型，随机分为5组：A组为空白对照组；B组于心梗后急性期静脉注射吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)；C组于心梗后急性期经冠状动脉造影行白体骨髓干细胞移植；D组为实验组，心梗后急性期行十细胞移植联合抗炎药物PDTC静脉注射；E组为常规干细胞移植组.心梗后4w经冠脉造影行干细胞移植。各组于心梗前、心梗后1h、心梗后1d、心梗后3d、心梗后7d、心梗后14d抽取实验动物外周静脉血测定血清白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)浓度；并以Powerlab +Millar压力导管检测分析心梗前、心梗后、干细胞移植后4w时心功能状况。干细胞移植后四周获取动物心脏，行HE染色切片观察心肌组织学变化，并通过Ⅷ因子免疫组化染色计数新生血管密度。结果：D组与B组较之其余两组，抗炎症因子IL-10血清含量提前升高(p<0.05)，同时间点炎症因子TNF-α、CRP血清浓度显著降低(p<0.05)；D组与E组行干细胞移植后心功能指标包括左心室发展压(LVDP)、左室压上升及下降最大速率(+dp/dtmax，-dp/dtmax)与对照组相比均有明显改善(p<0.05)；D组与E组移植后梗死交界区新生血管密度与对照组相比明显升高(p<0.05)。结论：1.心梗后急性期静脉注射PDTC后炎症因子表达水平下降，能明显抑制心梗组织的炎性反应。2.心梗后急性期干细胞移植联合抗炎治疗能够在心梗后抑制心室重构的进展、改善心功能。3.心梗后急性期干细胞移植联合抗炎治疗能够改善梗死周边区血供。
33.磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C与骨髓间充质干细胞老化
- 孙春辉;王楠;黄洁;辛洁;彭芬;任垠石;张尚立;苗俊英
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：骨髓间充质干细胞(Bone marrow stromal cells，BMSCs)通过体外扩增及体内移植可以治疗多种疾病。但是体外扩增导致间充质干细胞老化，因此限制其应用。为了解间充质干细胞的老化机制，我们检测了在BMSC老化过程中磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C(PC-PLC)的活性，膜整联蛋白β4，小窝蛋白1(caveolin-1)的表达及活性氧(ROS)水平的变化。结果表明，伴随细胞的老化，胞内PC-PLC活性，膜整联蛋白84，小窝蛋白1表达及ROS水平均上调。用D609选择性抑制PC-PLC的活性可以显著降低衰老相关-β-半乳糖苷酶染色阳性的细胞数。D609可以恢复BMSCs增殖及向脂肪细胞分化的能力。此外，D609抑制了膜整联蛋白β4，小窝蛋白1及ROS的升高。这些数据表明，PC-PLC在BMSCs老化中具有重要作用，并与膜整联蛋白β4，小窝蛋白1及BOS相关联。
34.PCL/LDI基可降解聚氨酯的合成及其电纺丝研究
- 韩健;曹润武;叶霖;张爱英;张健;冯增国
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：以L-赖氨酸乙酯二盐酸盐与三光气反应，合成了一种新型的氨基酸类二异氰酸酯L-赖氨酸乙酯二异氰酸酯(LDI)。然后，聚氨酯的合成采用两步反应进行，分子量为2000的聚(ε-已内酯)二元醇(PCL)首先与LDI反应生成预聚物，然后再与扩链剂1，4-丁二醇(BDO)反应合成聚氨酯(PU)。对PU进行了GPC、IR、DSC和1Ⅱ-NMR的表征，力学性能测试表明此聚氪酯具有良好的机械性能，其拉伸强度最高可达23MPa。对聚氨酯进行了初步的降解性能研究，聚氨酯薄膜分别在PBS溶液中水解降解和在含有脂肪酶AK的PBS溶液中酶促降解。水解降解9周后质量损失为60％，酶促降解15天后质量损失为65％，说明聚氨脂具有可降解性。最后，对聚氨酯做为组织工程血管支架的电纺丝加工性能进行了研究。电纺丝直径随浓度的增加而增加，电纺丝的拉伸强度可达8MPa，缝合强度为12N，孔隙率为75％，爆破压可达150～170KPa，毒性较小，有利于细胞生长，符合组织工程对支架的要求。
35.人胎盘来源间充质干细胞在低氧无血清条件下的生物学特性
- 黄永灿;杨志明;陈晓禾;李秀群;王佳;邓力
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：间充质干细胞(MSCs，mesenehymal stem cells)是目前组织工程研究中重要的种子细胞来源，具有广泛的应用前景。本实验中，我们从人胎盘基蜕膜分离得到间充质于细胞(placental decidua basalis-mesenchymal stem cells，PDB-MSCs)，并探讨其在低氧无血清培养环境下的牛物学特性。联合运用酶消化和密度梯度离心的方法从人胎盘基蜕膜分离MSCs；在体外构建低氧(1％O2)和无血清的培养模型(0％FBS/H-DMEM)；利用MTT法、集落形成单位(CFU-F，Colony-forming unit-fibroblast assay)和凋亡流式试剂盒检测PDB-MSCs在低氧无血清环境下的增殖、克隆形成以及凋亡情况。实验发现，PDB-MSCs具有与骨髓MSCs(BM-MSCs，bone marrow derived mesenehymal stem cells)相似的形态特征，为长梭形；同时表达与BM-MSCs相似的细胞表型，并且部分表达SSEA-1，SSEA-3，SSEA-4，TRA-1-60，TRA-1-81，Oct-4等只存在于胚胎干细胞的相关表型；此外PDB-MSCs可以分化为成骨、成脂和成软骨样细胞，具有多向分化潜能。在96h内PDB-MSCs能较好的耐受低氧无血清的培养环境，与常规培养比，细胞没有发生显著性的凋亡(P>0.05)；低氧促进PDB-MSCs增殖和克隆的形成(P<0.01)，但PDB-MSCs在低氧无血清的培养环境下，生长缓慢，克隆形成能力明显降低(P<0.01)。总的来说，胎盘是MSCs的一个新来源，优势明显，PDB-MSCs在一定程度上耐受低氧和无血清培养环境，可以作为缺血相关组织工程产品种子细胞的。
36.骨髓间充质干细胞条件培养液对心肌梗死后细胞凋亡的影响
- 张志伟;沈振亚
- 《华北地区第十七届职业卫生学术交流会》 | 2006年
摘要：目的：研究骨髓间充质干细胞及其条件培养液对急性心梗期心肌细胞凋亡的影响，对可能其机制进行初步探讨。方法：应用明胶海绵栓塞LAD，建立心梗模型。分别于心梗前、心梗后75分钟、心梗后4小时注射干细胞或条件培养液，在第4周时进行如下检测：行Powerlab检查评估心功能，组织学观察各组移植细胞的情况，测算心梗面积，检测氧化应激产物8-羟基2-，脱氧鸟苷(8-OHdG)的表达和Ⅷ因子的表达，Western blot检测细胞凋亡产物active caspase 3及phospho-SMAD2的表达。结果：(1)移植后，培养液组与对照组、干细胞组相比，LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax等指标明显升高(P<0.05)；(2)培养液组8-OHdG与对照组、干细胞组相比明显减少(P<0.05)；(3)培养液组active caspase3、phospho-SMAD2蛋白表达与对照组、干细胞组相比明显减少(P<0.05)；(4)培养液组心梗面积减少。结论：1、急性心肌梗死后，骨髓间充质下细胞条件培养液能减少梗死区心肌细胞caspase 3和phospho-SMAD2蛋白表达，减少梗死心肌面积，改善心脏功能，效果优于细胞移植。