LIM矿化蛋白1/低氧诱导因子1α慢病毒载体转染脂肪源性干细胞的成骨分化

摘要

背景：LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α作为胞内蛋白，可分别从诱导成骨分化及促进血管再生两个方面促进成骨，联合二者高效诱导脂肪源性干细胞成骨分化具有重要的意义。目的：探讨慢病毒载体介导的LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染的脂肪源性干细胞成骨分化的情况。方法：应用反转录PCR技术克隆目的基因LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α片段，并分别克隆于慢病毒骨架质粒 pLVX-EF1α-DsRed-Hyg 和 pLVX-EF1α-IRES2-AcGFP1中，构建慢病毒载体主体质粒pLVX-EF1α-DsRed-Hyg-RLMP-1和 pLVX-EF1α-AcGFP-RHIF-1α，随即与辅助质粒和包装质粒共转染Lenti-X 293T细胞，包装慢病毒载体；采用组织块加酶消化法分离培养大鼠脂肪源性干细胞，使用流式细胞仪对其进行鉴定。分别在慢病毒转染脂肪源性干细胞3，7，14 d后，应用反转录PCR方法检测脂肪源性干细胞中成骨基因骨形态发生蛋白2、Runx-2、碱性磷酸酶、骨钙蛋白表达水平的同时检测血管内皮生长因子的表达水平。结果与结论：pLVX-EF1α-DsRed-Hyg-RLMP-1和pLVX-EF1α-AcGFP-RHIF-1α可有效地转染入大鼠脂肪源性干细胞；反转录 PCR结果显示成骨基因骨形态发生蛋白2、Runx-2、碱性磷酸酶、骨钙蛋白在 LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染后第7天都开始明显过表达，并且可持续到14 d。说明LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染脂肪源性干细胞可提高其成骨活性。