K亚群禽白血病病毒细胞受体的鉴定

摘要

禽白血病病毒(ALV)进入细胞启动感染依赖于其囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合.K亚群ALV(ALV-K)是2012年从我国本地芦花鸡中分离到的一个ALV新亚群.为了鉴定ALV-K的细胞受体,本研究利用真核细胞表达了A和K亚群ALV gp85蛋白,并利用实验室前期拯救的重组病毒RCAS-A-GFP和RCAS-K-GFP进行病毒受体的交叉干扰试验,结果显示A亚群ALV (ALV-A) gp85蛋白能够抑制ALV-K的感染,同样ALV-K gp85蛋白也能够抑制ALV-A的感染,存在受体交叉干扰现象,因而推测二者可能共用细胞受体.已有研究表明Tva是ALV-A的细胞受体,本研究利用Co-IP和Pull-down试验检测了ALV-K gp85与Tva的互作,结果显示ALV-K gp85蛋白能与可溶性的Tva(sTva)相互作用.进一步的流式细胞术结果显示ALV-K gp85能够高效结合Tva,结合率在90％以上.为进一步验证Tva是否能介导ALV-K进入细胞,利用ALV的非易感细胞HEK293T进行了Tva受体重建试验,结果显示RCAS-K-GFP能够进入表达Tva的293T细胞并复制产生较强的绿色荧光.以上结果充分表明Tva也是ALV-K的细胞受体,能够介导ALV-K进入宿主细胞,启动其感染.该研究为阐明ALV-K侵入宿主细胞机制及抗病毒靶点筛选奠定了基础.