CD44抗体靶向绿色荧光蛋白质粒导入系统的构建及其特异性转染大鼠肾小管上皮细胞的观察

摘要

目的:以葡萄球菌A蛋白-多聚赖氨酸交联物(SPA-PLL交联物)为"桥",构建CD44抗体靶向的质粒导入系统,观察该导入系统能否特异地将质粒导入细胞中并使之有效表达.方法:以免疫组织化学染色观察大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)表面CD44受体的表达;以DNA凝胶阻滞实验测定SPA-PLL交联物与绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-C1)结合的适宜质量比;以酶联中和抑制法测定SPA-PLL交联物与CD44抗体结合的适宜质量比;将SPA-PLL交联物与CD44抗体和pEGFP-C1质粒以适宜的质量比混合即可组装成CD44抗体靶向pEGFP-C1质粒复合物;将该复合物转染NRK52E细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达.结果:NRK52E细胞表面可表达构建型CD44分子;不同浓度的SPA-PLL上交联物对pEGFP-C1质粒电泳的抑制作用不同,SPA-PLL交联物与pEGFP-C1质粒结合的适宜质量比为1:0.89;SPA-PLL交联物呈浓度依赖性抑制CD44抗体与包被的SPA结合,SPA-PLL交联物与CD44抗体结合的适宜质量比为1:0.5;CD44抗体靶向的pEGFP-C1质粒复合物对NRK52E细胞的转移效率为10%-25%并具有CD44抗体的特异性.结论:CD44抗体靶向的质粒导入系统的组装过程简单方便,各组份间为非共价结合;该靶向导入系统能将pEGFP-C1质粒特异性地导入NRK52E细胞中,并使该质粒在细胞中有效表达.