关节软骨细胞传代培养后细胞骨架与糖胺多糖合成变化的研究

摘要

目的 观察关节软骨细胞随传代细胞骨架(CSK)及糖胺多糖(GAG)合成量的变化,并探讨两者关系.方法 雄性8月龄新西兰白兔8只,空气栓塞处死,无菌酶解法分离双膝关节软骨细胞并行单层培养,取原代(P0)及传1、2代(P1、P2)的软骨细胞,分别接种于底部置有圆形盖玻片的24孔板中爬片并于细胞贴附后固定.以免疫荧光抗体对各代软骨细胞CSK染色,利用激光扫描共聚焦显微镜观察各代软骨细胞CSK形态并分别测定其CSK蛋白荧光强度.待每代细胞融合后,换无血清培养液,并于换液后12、24、36、48、60 h分别抽取上清液以阿尔新蓝法检测GAG浓度. 结果 软骨细胞随传代其中间纤维网状结构变松散且核周密集分布减少,而在细胞周边形成的微管突起增多.软骨细胞CSK蛋白荧光强度测定结果显示,P1软骨细胞肌动蛋白荧光强度较P0升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而P0与P2、P1与P2差异均无统计学意义(P＞0.05);波形蛋白和微管蛋白荧光强度随传代逐渐下降,P0、P1、P2软骨细胞间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).软骨细胞在各个时间点的上清液GAG浓度均随传代逐渐下降,P0、P1、P2软骨细胞间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 软骨细胞随传代其CSK主要成分发生形态及蛋白表达强度的改变,同时其合成基质之一的GAG合成量也随之下降,表明软骨细胞传代后特性的变化,且二者可能存在一定关联.