猪卵母细胞玻璃化冷冻后细胞骨架的变化

摘要

本试验旨在研究玻璃化冷冻后猪卵母细胞纺锤体、染色体和微丝的变化.从屠宰猪卵巢表面直径2(-)5 mm卵泡中采集未成熟(GV期)卵母细胞,由GV期卵母细胞经成熟培养获得体外成熟(MⅡ期)卵母细胞.GV期和MⅡ期卵母细胞各分为3组:对照组、冷冻保护剂处理组和玻璃化冷冻组.MⅡ期卵母细胞经分组处理后直接用于激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)样本;而GV期卵母细胞处理后先经44 h成熟培养,再用作LSCM样本.供试卵母细胞经固定、免疫荧光染色后,于LSCM下观察.结果表明,冷冻保护剂处理组GV期卵母细胞经成熟培养后,其纺锤体结构、染色体排列与微丝分布正常率分别为42.9％、89.6％和28.6％,玻璃化冷冻组此3项指标的正常率分别为1 0.1％、36.4％和16.9％,两组间差异显著(P＜0.05);除冷冻保护剂处理组染色体正常率与对照组无异外,两试验组的其它指标均明显低于对照组(分别为79.5％,93.1％和72.3％,P＜0.05).MⅡ期卵母细胞冷冻保护剂处理组的纺锤体结构、染色体排列与微丝分布正常率分别为34.4％、61.3％和47.9％,而冷冻组分别为12.9％、56.7％和37.2％;两组均显著低于对照组(分别为78.3％,90.1％和72.8％,P＜0.05).本试验结果表明,猪GV期和MⅡ期卵母细胞经冷冻保护剂处理或玻璃化冷冻保存后,均造成了纺锤体、染色体和微丝不可逆的损伤,这可能是影响卵母细胞成熟、受精与发育的重要原因.