CD40配体对转CD40 cDNA的人肺癌细胞功能调节的研究

摘要

目的研究CD40配体(CD40L,CD154)对CD40阴性肺癌细胞系转染CD40 cDNA后(即CD40高表达细胞系)的调节作用,评价CD40作为治疗靶抗原的潜能.方法通过流式细胞术筛选CD40阴性细胞系,即GLC-82细胞.以3D5细胞为模板,以pCDNA3为载体,通过基因克隆技术制备CD40 cDNA并转染到GLG-82细胞中,建立CD40高表达细胞系,即GLC-82/CD40.在细胞培养液中加入0.1μg/mlCD40L,通过流式细胞术和MTT试验检测CD40L对细胞表型、细胞生长、细胞周期及凋亡的影响.结果Western蛋白印迹检测、限制性酶切电泳、DNA测序和流式细胞仪测定均证明了CD40cDNA转染成功,转染后细胞的CD40表达率高达95.9%.CD40L与CD40作用后,使GLC-82/CD40细胞系上MHC-I、ICAM-1和Fas分子的表达增强,EGFR表达减弱.细胞生长受到抑制,第5天受抑最明显,受抑率为30%,但无周期特异性变化.CD40L停用48 h后,各种指标的变化有所恢复.CD40L对原有高表达CD40的Calu-3肺癌细胞上述指标的影响较GLC-82/CD40更明显,而对不表达CD40的GLC-82细胞无明显影响.所有肺癌细胞系均未出现细胞凋亡.结论CD40L对转染CD40 cDNA后CD40高表达肺癌细胞系具有免疫导向治疗的潜能.