环孢素A对冠心病患者T淋巴细胞共刺激分子CD40/CD40配体(CD40L)系统、CD134/CD134配体(CD134L)系统的影响

摘要

目的:本实验通过研究冠心病(CHD)患者共刺激分子CD40/CD40配体(CD40L)系统、CD134/CD134配体(CD134L)系统在CHD患者外周血CD4+T淋巴细胞上的表达情况，探究相关免疫机制在CHD中的作用，并体外应用不同浓度环孢素A(CSA)干预CD4+T淋巴细胞共刺激分子CD40/CD40L系统、CD134/CD134L系统的表达，为以CD40/CD40L系统、CD134/CD134L系统为靶点的疾病治疗提供切实有效的数据，同时为利用免疫抑制剂治疗CHD开展新的思路与方法。
　　方法:选择2013年3月-2014年1月天津市胸科医院心内科收治的冠心病或疑诊为冠心病患者71例，依据临床表现及心电图、超声等诊断方法，按照疾病严重程度不同分为4组:急性心肌梗死组(AMI)19例、不稳定型心绞痛组(UAP)18例、稳定型心绞痛组(SAP)17例和17例正常对象为对照组(N);抽取正常对照组(17人)和冠心病组(54人)外周血，进行冠脉造影检查及相关血液生化指标测定并收集基础资料，用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclearcells，PBMCs);利用流式细胞分析技术，分析各组PBMCs中CD4+T淋巴细胞上CD40/CD40L、CD134/CD134L系统的表达百分率，筛选共刺激分子表达率最高的组别;在加入不同浓度CSA(浓度梯度:0、0.1、0.01、10μg/mL)的情况下，刺激培养共刺激分子表达率最高组别的PBMCs，培养72小时后再次利用流式细胞分析技术，分析各亚组CD40/CD40L、CD134/CD134L系统的表达百分率。本研究在细胞水平上评价CSA对CD4+T淋巴细胞共刺激分子CD40/CD40L、CD134/CD134L系统表达的影响。应用SPSS18.0软件进行统计分析，P＜0.05差异有统计学意义。
　　结果:(1)各组间年龄、 LDL-C、Gensini积分、FT3、HDL-c等化验指标比较，统计学上有显著性差异(P＜0.05)，其中年龄、LDL-C、Gensini积分在不同病变程度组间依次升高，FT3、HDL-c在不同疾病严重程度组间依次降低。各组间其余基础资料比较无统计学差异(P＞0.05)。(2) CD4表达情况:与N组比较SAP组、UAP组、AMI组CD4表达均出现升高，且随着病变程度的增加而增加，差异有统计学意义(P=0.001); CD40表达显示:SAP组、UA组、AMI组CD40表达较N组升高且有统计学差异(P=0.001)，SAP组与UA组、AMI组比较有统计学差异(P＜0.05)，UA组与AMI组比较无统计学差异(P＞0.05); CD40L表达显示:SAP组、 UA组、AMI组中CD40L表达较N组增高，表达百分数在不同病变程度组间依次升高，两两比较差异均有统计学意义(P=0.001)。CD134、CD134L分子表达情况:AMI组、UA组CD134表达较N组增高，且有统计学意义(P＜0.05)，其余两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，CD134L表达在不同病变程度组间进行两两比较结果均无显著性差异(P=0.17)。(3)相关性分析:Gensini积分与CD40、CD40L表达量之间呈正相关(P=0.001)，即随着Gensini积分的增加CD40、CD40L表达量也增加，与CD134、CD134L不相关(P=0.693/0.892)。(4)研究证实AMI组各种共刺激分子表达率最高，AMI组中CD40表达量在CSA干预浓度0.1μg/mL、1μg/mL组低于0μg/mL、0.01μg/mL组(P＜0.01)，其余两两比较结果显示差异无统计学意义(P=0.076/0.552);CD40L表达百分数在CSA干预浓度0μg/mL、0.01μg/mL、0.1μg/mL组间两两比较均有统计学意义(P=0.001)，并随CSA干预浓度的增加呈逐渐降低的趋势，而0.1μg/mL组与1μg/mL组比较，差异无统计学意义(P=0.585);CD134及CD134L表达百分数在CSA不同干预浓度四组间显示随CSA干预浓度的增加呈逐渐降低的趋势，但组间两两比较结果显示差异均无统计学意义(P=0.779/0.721)。
　　结论:正常人及冠心病患者外周血CD4+T淋巴细胞均可以表达共刺激分子CD40/CD40L、CD134/CD134L系统。相比较CD134/CD134L，CD40/CD40L系统通过免疫机制更多的参与冠心病的发生与发展，CD134、CD134L并无明显作用;CSA通过抑制AMI患者外周血CD4+T淋巴细胞共刺激分子CD40/CD40L系统的表达，可以抑制动脉粥样硬化的形成，但对CD134/CD134L系统无作用，其作用机制尚不明确，因此尚不能确定CSA对CHD有治疗作用。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1．实验材料和方法

1．1 实验对象

1．2 实验相关试剂

1．2．1 主要试剂配制方法

1．3 实验仪器

1．4 实验方法

1．4．1 生化指标检测

1．4．2 人外周血单个核细胞(PBMCs)的分离

1．4．3 细胞培养

1．4．4 流式细胞仪相关调试

1．4．5 共刺激分子表达测定

1．5 统计学处理

2 结果

2．1 一般资料比较

2．2 入选患者冠状动脉造影结果

2．3 共刺激分子表达情况的比较

2．3．1 CD4表达情况

2．3．2 CD40、CD40L表达情况

2．3．3 CD134、CD134L表达情况

2．4 CSA抑制AMI患者CD4+T淋巴细胞共刺激分子CD40／CD40L、CD134／CD134L表达情况

3 讨论

结论

展望

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 CD40／CD40L及CD134／CD134L系统在冠心病发生发展中的作用

致谢