无功能垂体腺瘤中杀菌/渗透增强折叠家族蛋白B1基因的表达及其对肿瘤侵袭性的作用研究

摘要

目的探讨无功能垂体腺瘤中杀菌/渗透增强折叠家族蛋白B1（BPIFB1）基因的表达情况及其对垂体腺瘤增殖和侵袭性的影响。方法利用高通量基因表达（GEO）公共数据库垂体腺瘤芯片的数据,通过生物信息学分析方法筛选出侵袭性相关基因;然后选取5例侵袭性无功能垂体腺瘤和5例非侵袭性无功能垂体腺瘤的组织标本,通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色检测BPIFB1基因和蛋白的表达情况。在垂体腺瘤GH3细胞株中通过siRNA敲减BPIFB1的表达,采用细胞活性和细胞划痕实验等检测肿瘤细胞的增殖和迁移能力;采用实时荧光定量PCR测定基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9 mRNA的表达水平;采用蛋白质免疫印迹技术检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白的表达水平。结果生物信息学分析结果提示,侵袭性垂体腺瘤中BPIFB1的表达水平低于非侵袭性垂体腺瘤（log2FC=-5.29,P＆0.01）;免疫组织化学染色结果显示,侵袭性无功能垂体腺瘤中BPIFB1的表达水平（0.53±0.10）明显低于非侵袭性无功能垂体腺瘤（1.02±0.44）（P＆0.05）;实时荧光定量PCR结果显示,BPIFB1 mRNA的表达水平与肿瘤Knosp分级呈负相关（rs=-0.88,P＆0.01）。细胞活性实验结果显示,BPIFB1敲减GH3细胞的细胞活性（2.98±0.14）高于正常GH3细胞（2.14±0.05）（P＆0.01）;细胞划痕实验结果显示,BPIFB1敲减GH3细胞的迁移率[（43.82±3.74）%]高于正常GH3细胞[（17.53±2.05）%]（P＆0.01）。实时荧光定量PCR结果显示,BPIFB1敲减GH3细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达水平均高于正常GH3细胞（均P＆0.05）;蛋白质免疫印迹实验显示,BPIFB1敲减GH3细胞中EMT相关蛋白的表达水平与正常GH3细胞比较差异均有统计学意义（均P＆0.05）。结论侵袭性无功能垂体腺瘤中BPIFB1的表达水平降低,BPIFB1可能通过调控MMP的表达及EMT来抑制肿瘤的增殖和侵袭能力。