骨髓巨噬细胞M1/M2亚群失衡对免疫介导的新型再生障碍性贫血模型小鼠发病的影响

摘要

目的 探讨巨噬细胞对新型免疫介导的再生障碍性贫血(AA)模型小鼠发病的影响.方法 以正常雌性B6D2F1 (F1)小鼠作为空白对照(对照组,3只),应用双磷酸盐(Clodronate)脂质体尾静脉注射的方法去除小鼠的巨噬细胞(CLO组,4只),以PBS脂质体处理小鼠为阴性对照(PBS组,4只).并在注射脂质体后以全身辐照(TBI)联合异基因淋巴细胞输注的方法制备F1AA小鼠模型,分别记为CLO+AA组和PBS+AA组.骨髓活检病理学检查、外周血细胞计数观察各组小鼠AA的程度;流式细胞术检测小鼠骨髓CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群和巨噬细胞亚群;ELISA法检测各组小鼠外周血血浆中IFN-γ、TNF-α、G-CSF、GM-CSF、TPO、EPO的水平变化.结果 与PBS+AA组相比,去除巨噬细胞的CLO+AA组小鼠骨髓脂肪化明显改善.PBS+AA组和CLO+AA组的HGB分别为(91.50±31.63)、(110.65±24.15)g/L,PLT分别为(90.85±121.90)×106/L、(461.13±483.45)×106/L,差异均有统计学意义(P值均＜ 0.05).PBS+AA组和CLO+AA组CD4+T淋巴细胞占骨髓细胞的比例分别为(18.50±10.17)％、(7.58±8.00)％;CD8+T淋巴细胞占骨髓细胞的比例分别为(36.23±6.40)％、(6.67±5.78)％.去除巨噬细胞后,CD4+和CD8+T淋巴细胞比值均下降,但CD8+T细胞减少程度更大,差异均有统计学意义(P值均＜ 0.05).和PBS+AA组相比,CLO+AA组小鼠的脾脏和骨髓巨噬细胞比例均明显减少,M1型巨噬细胞减少程度明显高于M2型,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).PBS+AA组和CLO+AA组外周血中IFN-γ水平分别为(602.37±104.62)、(303.01±87.22)ng/L;TNF-α水平分别为(34.46±1.42)、(23.25±4.21)ng/L;GM-CSF水平分别为(9.32±2.00)、(64.85±12.25)ng/L;G-CSF水平分别为(5891.78±2632.39)、(17784.16±488.36)ng/L;EPO水平分别为(9667.31±4501.95)、(2078.02±897.56) ng/L;TPO的浓度分别为(6.36±2.09)、(11.67±2.86)ng/L,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 该实验证实在新型F1AA小鼠模型中巨噬细胞参与了AA的发病.提前去除巨噬细胞,F1AA模型小鼠的血象和骨髓损伤程度得以改善.正负造血调控因子的改变和巨噬细胞M1/M2亚群失衡可能是造成AA微环境损伤、最终引起AA发病的重要机制.