绿色荧光蛋白转基因大鼠神经干细胞体外分化与体内移植的实验研究

摘要

目的 探讨绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因大鼠胚胎脊髓神经干细胞(neural stem cells,NSC)体外增殖、分化的生物学活性以及植入体内后存活、分化和迁移的情况.方法对GFP转基因大鼠的胚胎脊髓NSC进行体外分离、培养和诱导分化,并应用特异性抗体分别对神经干细胞、神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞进行免疫荧光染色鉴定.建立F344大鼠胫神经切断的动物模型,将体外稳定传代的GFP-NSC单细胞悬液移植于胫神经远侧段.移植12周后取材,应用激光共聚焦显微镜和普通荧光显微镜观察神经干细胞体内的存活、分化和迁移情况,并对胫神经冰冻切片行神经元特异性免疫荧光染色鉴定.结果 通过体外分离培养的方法获得了稳定传代的GFP-NSC,体外诱导分化形成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞.GFP-NSC体内移植后,部分分化为神经元,并发出轴突样的结构向远端生长.结论 GFP-NSC具有良好的生物学活性,体内移植后可以分化为神经元,为进一步研究其体内移植防治骨骼肌失神经萎缩及治疗其他神经元损伤性疾病提供了实验依据.