缝隙连接蛋白43对成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白的调节作用

摘要

目的 探讨缝隙连接蛋白(Cx)43对成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)的调控作用.方法 利用Cx43-siRNA及其相关miRNA的抑制剂下调或上调人皮肤成纤维细胞(hDFBs)中Cx43的水平,利用Western印迹法和免疫荧光染色法检测细胞内COL-Ⅰ的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹法评估Cx43水平下降后COL-Ⅰ、基质金属蛋白酶(MMP)-1和MMP-9的mRNA和蛋白表达水平;用免疫共沉淀(Co-IP)法检测Cx43分别与MMP-1、MMP-9或蛋白激酶(PK)D1的结合情况.结果 COL-Ⅰ表达水平与Cx43水平呈负相关(P<0.001);Cx43水平降低导致MMP-1、MMP-9在mRNA及蛋白水平均显著增加(P<0.001,P<0.01,P<0.05);且PKD1表达也明显降低.结论 Cx43参与hDFBs中COL-Ⅰ的调控并发挥重要作用,其机制很可能与PKD1密切相关.