微小RNA-1236和外源性小分子双链RNA激活膀胱癌细胞p21表达作用的比较

摘要

目的人工合成与微小RNA（miRNA,miR）-1236所作用的p21基因启动子靶序列完全互补配对的4对小分子双链RNA（dsRNA）:dsP21-242、dsP21-243、dsP21-244和dsP21-245（dsP21-243序列配对程度最高）,分别观察其与miR-1236在激活人膀胱癌细胞株T24和EJ细胞中抑癌基因p21表达能力的差异。方法参照小激活RNA（saRNA）的设计原则设计合成4对dsRNA。分别转染阴性对照组（dsControl）、阳性对照组（miR-1236）和实验组（dsRNA）至T24和EJ细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测p21 mRNA和蛋白表达的水平。结果 FQ-PCR检测结果显示实验组中仅dsP21-245能明显促进两种细胞中p21mRNA水平的升高;且与阴性对照组比较,dsP21-245分别上调T24和EJ细胞中p21 mRNA的表达至2.32倍（P＜0.01）和2.84倍（P＜0.01）;与阳性对照组比较,两种细胞株中p21 mRNA的表达差异均没有统计学意义（P＞0.05）。RT-PCR检测结果证实了p21 mRNA表达变化的趋势。Western blot结果显示在两种细胞株中p21蛋白表达水平的升高与p21 mRNA水平的上调一致。其余3对dsRNA均未能显著上调两种细胞株中p21基因的表达（P＞0.05）。结论人工合成的dsP21-245能显著促进膀胱癌细胞中p21的高表达,且与miR-1236激活p21表达的能力差异无统计学意义。