长链非编码RNA膀胱癌相关转录本1靶向调控微小RNA-20b-5p对宫颈癌细胞自噬及顺铂敏感性的影响

摘要

目的 探讨长链非编码RNA膀胱癌相关转录本1(LncRNA BLACAT1)对宫颈癌细胞自噬及顺铂敏感性的影响及其分子机制.方法 本研究起止时间2018年6月至2019年10月,体外培养人正常宫颈上皮细胞HUCEC、宫颈癌细胞株ME180、C-33A、Hela与顺铂耐药宫颈癌细胞株Hela/DDP,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中BLACAT1、微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)的表达量.以Hela/DDP细胞为研究对象,分别将BLACAT1小分子干扰RNA(si-BLACAT1)及其阴性对照(si-NC)、si-BLACAT1与miR-20b-5p特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照(anti-miR-NC)、si-BLACAT1与miR-20b-5p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-20b-5p)转染至Hela/DDP细胞.甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞抑制率为50％时的顺铂浓度(顺铂IC50值)以此评估顺铂敏感性;蛋白质印迹法(Western blotting)检测p62、微管相关蛋白轻链3I(LCB3-Ⅰ)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LCB3-Ⅱ)表达量.双荧光素酶报告实验验证BLACAT1与miR-20b-5p的靶向关系.结果 与HUCEC相比,宫颈癌细胞株ME180、C-33A、Hela中BLACAT1的表达水平升高[(0.80±0.16)比(3.41±0.14)、(3.72±0.14)、(2.52±0.15)](P<0.05),miR-20b-5p的表达水平降低[(1.00±0.16)比(0.42±0.16)、(0.33±0.14)、(0.38±0.15)](P<0.05),Hela细胞与Hela/DDP细胞相比差异有统计学意义[(2.52±0.15)比(5.23±0.14);(0.38±0.15)比(0.21±0.11)](P<0.05);与si-NC组相比,si-BLACAT1组p62蛋白水平降低[(0.82±0.13)比(0.24±0.11)](P<0.05),LCB3-Ⅱ蛋白水平升高[(0.64±0.15)比(0.95±0.13)](P<0.05),顺铂IC50值降低[(16.82±3.24)比(6.21±1.25)](P<0.05);双荧光素酶报告实验证实BLACAT1能够靶向结合miR-20b-5p;与si-BLACAT1+anti-miR-NC组相比,si-BLACAT1+anti-miR-20b-5p组p62蛋白水平升高[(0.27±0.13)比(1.66±0.15)](P<0.05),LCB3-Ⅱ蛋白水平降低[(2.60±0.15)比(0.85±0.12)](P<0.05),顺铂IC50值升高[(6.23±1.20)比(15.67±2.16)](P<0.05).结论 LncRNA BLA?CAT1靶向抑制miR-20b-5p表达而调控宫颈癌细胞自噬从而降低顺铂敏感性.