TLR4基因小干扰RNA对缺氧复氧诱导BV-2细胞炎症因子分泌的影响

摘要

目的研究Toll样受体4（TLR4）基因小干扰RNA（siRNA）对体外缺氧复氧条件下诱导BV-2细胞分泌TNF-α的抑制作用。方法小鼠小胶质细胞株BV-2置于六孔培养板培养,随机分为N组（正常培养组）、H组（缺氧复氧组）、T组（缺氧复氧+TLR4-siRNA转染组,转染质粒pEGFP-H1/TLR4-siRNA）、C组（缺氧复氧+对照siRNA转染组,转染含对照序列的质粒pEGFP-H1/对照-siRNA）和B组（缺氧复氧+空白质粒转染组,转染pEGFP-H1空质粒）共5组。其中H组、T组、C组和B组细胞缺氧培养3 h后复氧培养24 h,运用脂质体转染技术介导质粒转染,流式细胞术检测转染后BV-2细胞EGFP的表达率,RT-PCR方法检测各组BV-2细胞TLR4 mRNA和NF-κB p65 mRNA的表达水平,Western blot方法检测各组BV-2细胞TLR4蛋白表达变化,ELISA方法检测各组上清液中TNF-α含量。采用方差分析进行统计分析。结果转染后BV-2细胞EGFP的表达率为（67.58±7.16）%;经缺氧复氧处理后,H组、T组、C组和B组的TLR4 mRNA、NF-κB p65 mRNA、TLR4蛋白水平较N组均明显上调（P＜0.01）,各组上清液TNF-α含量较N组也明显升高（P＜0.01）;而T组TLR4 mRNA、NF-κBp65 mRNA、TLR4蛋白表达量和上清液TNF-α含量较H组、C组和B组均明显下调（P＜0.01）;C组和B组分别与H组相比,各项检测指标表达均无明显变化（P＞0.05）。结论针对TLR4 mRNA的小干扰RNA可以有效的抑制缺氧复氧诱导的BV-2细胞的炎症反应。