RNA干扰对缺血再灌注诱导BV-2细胞分泌炎症因子的抑制作用

摘要

目的：研究针对TOLL样受体4(TOLL-Like receptor4,TLR4)基因的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术对小鼠小胶质细胞系BV-2细胞被缺血再灌注诱导分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的抑制作用.rn 方法：将培养的BV-2细胞随机分为C组(正常培养组)和IR组(缺血再灌注组)两大组,其中IR组又分为N组(非转染组)、T组(TLR4-siRNA转染组,转染质粒pEGFP-H1/TLR4-siRNA)、TC组(对照siRNA转染组,转染含对照序列的质粒pEGFP-H1/对照-siRNA)和TB组(空白对照组,加入pEGFP-H1质粒)四个亚组.运用脂质体转染技术将pEGFP-H1/TLR4-siRNA转染至培养的BV-2细胞,观察细胞系中荧光表达强度,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组BV-2细胞TLR4和核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)基因的表达,ELISA方法检测各组BV-2细胞TNF-α含量变化.rn 结果：将pEGFP-H1/TLR4-siRNA转染至BV-2细胞后,EGFP的表达率为(67.58±7.16)%;各组BV-2细胞经缺血再灌注处理后,TLR4、NF-kB mRNA水平以及TNF-α含量均较缺血再灌注前明显升高,而转染组中TLR4和NF-kB mRNA表达则得到部分的抑制,TNF-α含量(0.96±0.35 ng/ml)较未转染组明显减少,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01).rn 结论：针对TLR4mRNA的RNA干扰技术能够有效抑制BV-2细胞经缺血再灌注诱导的TLR4和NF-kB基因的表达,分泌TNF-α含量减少,表明针对TLR4 mRNA的RNAi技术可以有效的抑制缺血再灌注诱导的BV-2细胞的炎症反应.