乳腺癌耐药细胞ER表达状态影响细胞对屈洛昔芬和阿霉素的敏感性

摘要

背景与目的:雌激素受体(estrogenreceptor,ER)阳性乳腺癌细胞株来源的耐药细胞株中,ER表达缺失或下降,且细胞生长速度减慢。本文的目的是研究MCF-7/Adr乳腺癌耐药细胞株中ER表达状态与细胞对屈洛昔芬(droloxifene,Dro)和阿霉素(Adriamycin,Adr)敏感性之间的关系。方法:Westernblot法检测MCF-7/Adr及其亲本MCF-7细胞中ER蛋白的表达,构建ER的真核细胞表达质粒(pCER),利用LipofectAMINETM将ER基因导入MCF-7/Adr细胞,经G418抗性筛选获得阳性克隆(MTER/Adr),PCR、Westernblot法鉴定并检测ER基因的整合和蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期变化,MTT法检测Dro及Adr对细胞增殖的影响。结果:在MCF-7细胞中可检测到ER蛋白的表达,而MCF-7/Adr细胞中使用Westernblot检测不到ER蛋白的表达。成功构建真核细胞表达质粒pCER并转染MCF-7/Adr细胞,阳性克隆MTER/Adr整合了ER基因并获得表达。经MTT分析,10μmol/LDro对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用,而到20μmol/L时对MCF-7/Adr细胞的生长有抑制作用。ER转染MCF-7/Adr细胞后,15μmol/L的Dro对其生长出现抑制作用,使细胞多分布于G0/G1期。同时细胞对Adr的敏感性下降。结论:MCF-7/Adr细胞中ER的丢失引起细胞对以ER为靶点的Dro治疗不敏感。