小反刍兽疫病毒野毒与疫苗毒双重荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立

摘要

对GenBank中的小反刍兽疫野毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)及疫苗毒株的基因序列进行分析,设计两对引物和两条特异探针,建立小反刍兽疫病毒野毒与疫苗毒株的双重荧光RT-PCR鉴别检测方法.特异性检测表明,建立的双重荧光RT-PCR方法,可特异检测野毒(FAM通道)和疫苗毒(VIC通道).灵敏度实验表明,FAM通道可检测到10-5稀释度的RNA(3.576 ng/mL),VIC通道可检测到10-3稀释度的RNA(27.6 ng/mL).重复性实验表明,该双重荧光RT-PCR方法重复性较好.用建立的二重荧光RT-PCR方法对20份组织样品进行检测,结果显示,该方法可以有效区分野毒和疫苗毒株,且野毒检测结果与实验室确诊阳性结果一致,可以用于临床检测.