鉴别猪伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒双重PCR检测方法的建立

摘要

依据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)基因序列,分别设计了gE和gH两对引物,以PRV闽A株、Bartha (gE-)株和Norden(Tk-)株为模板,筛选最佳反应条件,建立了检测猪伪狂犬病病毒野毒株与疫苗毒株的鉴别PCR方法.该方法能从PRV闽A株、Norden(Tk-)株中扩增出一条355 bp的条带,但Bartha(gE-)株没有扩增出该目的条带.对正常细胞、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV)进行检测,结果均为阴性,没有出现交叉反应.在对单项PCR反应条件(引物浓度、Mg2+浓度、退火温度等)优化的基础上,建立了鉴别猪伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒的双重PCR检测方法,并分别用双重PCR和单项PCR检测15份临床病料,两者符合率为97.5％,表明该双重PCR检测方法有较高的敏感度,可以用于临床病料的检测.