猪繁殖与呼吸综合征病毒湖南分离株ORF5基因的遗传进化分析

摘要

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在湖南省地方猪保种场的感染情况,本研究在2019-2020年间从湖南省2个地方猪保种场采集287份全血样品.首先将血样混合成41份,采用RT-PCR或PCR法进行PRRSV病原检测,进一步通过高保真PCR扩增从PRRSV阳性样品中扩增PRRSVORF5基因;测序后利用DNAStar软件分析获得的ORF5基因及其编码的GP5氨基酸与国内外不同PRRSV毒株的遗传进化关系;最后用PRRSV阳性血清接种Marc-145细胞,经盲传分离毒株,并用Reed-Muench法测定病毒滴度.结果显示,检测的41份混样中有3份PRRSV病原核酸呈阳性;从PRRSV阳性混样中单独扩增获得6条PRRSV ORF5基因序列,均属于PRRSV-2型的lineage 8分支,相似性为99.2％～99.8％;6条ORF5基因编码的GP5蛋白氨基酸序列在信号肽区域(第23位)、潜在的N-糖基化位点(第33位)和表位C(第59位)存在差异;PRRSV阳性血清接种Marc-145细胞盲传5代后出现明显的细胞病变,获得1株PRRSV毒株,命名为NX-1,病毒TCID50为4×105/mL.本研究表明,湖南省地方猪保种场存在PRRSV感染,感染的PRRSV属于PRRSV-2型的lineage 8,其GP5氨基酸序列存在的多处变异可能是造成疫苗免疫失败的原因之一,以上结果可为湖南省地方猪保种场的免疫防控提供一定参考.