猪繁殖与呼吸综合征病毒新疆株XJ-Q的分离鉴定及其Nsp2和ORF5基因遗传变异分析

摘要

本研究从新疆某养殖场采集疑似猪高热病病例的肺脏，猴肾细胞(Marc-145)分离病毒、鉴定，并克隆和分析其部分功能基因。
　　将疑似猪高热病病例的肺组织病料接种至单层Marc-145细胞上进行分离培养，盲传3代后，Marc-145细胞出现了典型的细胞病变(CPE)。使用设计的特异性鉴定引物经RT-PCR方法扩增到约430 bp基因片段。测序与分析表明，分离出的病毒为PRRSV（猪蓝耳病）毒株，并命名为新疆XJ-Q病毒株。该毒株传至4代后，其半数细胞培养物感染量(TCID50)为10-5.5/0.1 mL，电镜下观察到约为50nm病毒粒子。
　　用于新疆PRRSV XJ-Q株Nsp2和ORF5基因的RT-PCR检测。经RT-PCR成功扩增出新疆XJ-Q株Nsp2的769 bp和ORF5的603 bp的基因片段，本试验通过比对PRRSV国内外毒株的Nsp2和ORF5基因序列，设计2对特异性引物PN1/PN2和PO1/PO2，并克隆至PUCm-T质粒载体。对正确的重组质粒进行PCR鉴定、酶切和测序。
　　序列比较结果表明，获得的XJ-Q分离株的Nsp2基因与美洲分离株VR-2332的相似性为75.8％～92.4％，与欧洲分离株LV的相似性仅为47.7％;而XJ-Q分离株的ORF5基因与美洲型分离株的相似性为88.1％～96.4％，与欧洲分离株LV毒株的相似性只有62.4％，由此说明PRRSV XJ-Q属于美洲型毒株。依据ORF5序列对国内分离株进行了系统进化分析，XJ-Q株与香港HK13和HB-1亲缘关系最近，表明美洲型毒株中XJ-Q株与HB-1株同属一个亚群。推导氨基酸的比较结果表明，新疆地区的PRRSV XJ-Q株在ORF5基因编码蛋白与毒力相关的氨基酸（13位和151位氨基酸）存在着变异。

目录

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 猪繁殖与呼吸综合征

1．2 病原学特征及理化特性

1．3 PRRSV的分离及培养特性

1．4 PRRSV的分子生物学研究

1．5 PRRSV Nsp2和ORF5基因遗传变异

1．6 流行特点

1．7 PRRS的发病机理

1．8 PRRS的诊断和检测技术

1．9 研究的意义和目的

第2章 PRRSV XJ-Q株的分离和鉴定

2．1 材料与方法

2．2 结果

2．3 讨论

第3章 PRRSV XJ-Q分离株Nsp2和ORF5的基因克隆，及遗传变异分析

3．1 材料与方法

3．2 结果与分析

3．3 讨论

第4章 结论

参考文献

致谢

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