双重实时荧光PCR法检测食品和饲料中的鸡源性成分

摘要

根据鸡线粒体DNA细胞色素b基因序列和内参照基因PUC18质粒基因序列设计特异性引物和以不同荧光素标记的TaqMan探针.通过对反应条件的优化筛选,建立能同时扩增鸡源性成分和内参照基因成分的双重实时荧光PCR检测方法.设置内参照反应是为了监控反应体系中是否含有PCR反应的抑制物,避免出现假阴性结果.分别以鸡、鸭、鹅、火鸡、牛、羊、猪、鱼、兔、驴、鹿、狗、马、鸽子、大豆、玉米、小麦、大米、马铃薯及番茄的线粒体DNA作为模板进行特异性试验,结果表明该方法仅能特异性扩增鸡源性成分,而对其它物种未见有效扩增.通过灵敏度测试,该方法检出限达0.01％.所制定的方法特异性高,灵敏度好,可以作为食品和饲料中鸡源性成分的高效检测方法.