大鼠骨髓来源的平滑肌祖细胞培养及鉴定

摘要

目的 培养和鉴定从鼠骨髓中分离的平滑肌祖细胞,观察其在体外增殖、分化过程中相关细胞表型的变化.方法 用密度梯度离心法获得鼠骨髓单个核细胞,用条件培养基进行诱导分化,免疫荧光双标技术(α-SMA、CD14)鉴定平滑肌祖细胞(SPC).Western blot检测α-SMA蛋白,Real-time PCR法检测α-SMA mRNA表达.结果 鼠骨髓单个核细胞诱导培养4 d时开始贴壁,7 d变为梭形,14 d呈典型的"峰""谷"样形态;4 d时开始出现α-SMA-CD14双荧光阳性细胞;培养1 d时无α-SMA蛋白表达,4 d后增强,10～14 d达高峰,21 d仍持续高水平;培养1 d的细胞α-SMA mRNA表达低(P<0.01),4 d后增强,14 d达高峰(P<0.01),21 d后仍持续高水平.结论 本试验成功地从鼠骨髓单个核细胞中分离培养出SPC,并在体外扩增分化成平滑肌样细胞.