大鼠骨髓来源内皮祖细胞的分离培养及鉴定

摘要

目的 建立体外分离培养及鉴定大鼠骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的方法.方法 采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离得到骨髓单个核细胞,并结合差时贴壁法,收集24 h后未贴壁细胞,然后用添加有多种细胞因子的内皮细胞基础培养基(endothelial basal medium,EBM-2)诱导培养获取EPCs.通过形态学观察、CD133和VEGFR-2抗体免疫荧光染色并结合FITC-UEA-1和Dil-ac-LDL的摄取功能来对EPCs进行鉴定分析,同时通过体外管样结构形成能力对EPCs进行功能性评价.结果 在EBM-2培养基中诱导培养7 d后,出现类似于血岛样的细胞集落,集落中央的细胞呈圆形,周边的细胞呈放射状;80%以上的细胞都是CD133+/VEGFR-2+细胞,并且这些细胞同时能够摄取Dil-ac-LDL和结合FITC-UEA-1;EPCs在基质胶表面形成管腔样结构.结论 密度梯度离心法结合差时贴壁法从骨髓中分离获得的单个核细胞,然后经EBM-2条件培养基诱导培养可获得较高纯度的EPCs.