siRNA沉默mfn2表达对睾酮抑制大鼠血管平滑肌源性泡沫细胞形成的影响

摘要

目的 研究线粒体融合素2基因(mfn2)在睾酮抑制大鼠血管平滑肌源性泡沫细胞形成过程中的作用.方法 设计并化学合成靶向m2基因的小分子干扰RNA(siRNA),脂质体法将mfn2-siRNA转染大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs),实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测mfn2 mRNA及蛋白的表达.培养大鼠VSMCs,利用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导形成泡沫细胞.实验分组:1)对照组;2)睾酮组;3)睾酮+阴性对照siRNA组;4)睾酮+mfn2-siRNA组.后3组预先加入睾酮和(或)siRNA预处理12h,再与ox-LDL共培养48 h.油红O染色及酶荧光法检测细胞内脂质含量,免疫印迹法检测细胞内Mfn2、清道夫受体CD36和ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)的表达.结果 转染mfn2-siRNA后12、24、36和48 h均能有效沉默mfn2 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05).与对照组比较,睾酮组及睾酮+阴性对照siRNA组脂质蓄积减少,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均降低(P＜0.05),Mfn2和ABCA1表达增加(P＜0.05),CD36表达降低(P＜0.05),细胞泡沫化受到抑制.与睾酮+阴性对照siRNA组比较,睾酮+mfn2-siRNA组脂质蓄积增加,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均增加(P＜0.05),Mfn2和ABCA1表达降低(P＜0.05),CD36表达增加(P＜0.05).结论 睾酮通过调节mfn2及其下游CD36和ABCA1表达,抑制ox-LDL诱导下VSMCs转变为泡沫细胞.