异丙酚对原代培养新生大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的影响研究

摘要

建立新生大鼠海马神经细胞原代培养的方法,并利用Annexin V-PI双染法流式细胞仪检测培养过程中细胞早期凋亡和死亡情况.取新生Wister大鼠,无菌条件下断头、取脑、解剖显微镜下分离出海马组织,采用胰蛋白酶消化和机械分离相结合方法分离神经细胞.接种在事先包被0.01%多聚左旋赖氨酸的35mm无菌培养皿,置于37℃ 10%CO<,2>培养箱培养.24h后更换为培养液.3~5d天后加入阿糖胞苷抑制胶质细胞过度增殖,48h后更换为新鲜培养液.取培养6~8d细胞进行神经特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色.分别收获第0、1、3、5、8、11及18d细胞进行Annexin V-PI染色,利用流式细胞仪检测神经元早期凋亡和死亡.相差显微镜下可见神经细胞,特征明显并形成典型的神经突起网络.NSE在神经细胞胞浆呈阳性着色.新分离细胞存活率为83.72%,早期凋亡率15.22%;随着培养时间延长,细胞存活率随时间降低,而死亡率与早期凋亡率增高.在每一检测点早期凋亡检出率所占绝对值平均为死亡率的5~10倍.本研究中的细胞分离和培养技术可以获得较为理想的海马神经细胞;在培养过程中海马神经细胞的死亡率和早期凋亡率随着培养时间的延长而增高;细胞凋亡是导致神经元死亡的一个重要原因.

目录

英文缩写及名词对照

实验第一部分新生大鼠海马神经细胞的原代培养以及利用AnnexinV-PI双染法流式细胞仪对培养过程中细胞早期凋亡和死亡的检测

引言

一试剂及仪器

二动物来源

三试剂及溶液配制

四包被培养板或培养皿

五接种方法与步骤

六神经细胞鉴定-NSE免疫细胞化学染色

七Annexin V-PI双染法流式细胞仪检测培养过程中细胞凋亡和死亡

八结果

九讨论

参考文献

附图

实验第二部分不同浓度异丙酚对原代培养新生大鼠海马神经细胞缺氧复氧损伤的影响

引言

一试剂及仪器

二动物来尖源

三试剂及溶液配制

四海马神经细胞的原代培养

五实验分组及缺氧模型制备

六指标测定

七数据处理及统计分析

八结果

九讨论

参考文献

附录

综述 脑保护的药物研究进展

1 缺血/缺氧对脑的影响

2 缺血/缺氧引起脑损伤的机制

3 巴比妥类药物的脑保护

4 吸入麻醉药物/异氟烷的脑保护

5 异丙酚脑保护

6 其它麻醉剂的脑保护

7 离子通道阻滞剂

8 兴奋性氨基酸受体拮抗剂

9 镁剂

10 脑保护临床研究中的问题

参考文献

个人简历

读博期间文章发表情况及参与编写的专著

致谢