第一部分 原发性骨髓纤维化患者基因突变的研究;第二部分 原发性骨髓纤维化患者的细胞遗传学研究;第三部分 血清铁蛋白是中国骨髓增生异常综合征中危--1组患者的独立预后因素

摘要

第一部分原发性骨髓纤维化患者基因突变的研究 研究目的：探讨原发性骨髓纤维化(PMF)患者ASXL1、IDH1/2、SRSF2、CALR和MPL基因突变及其临床意义。 研究方法：对484例PMF患者按2008年WHO诊断分型标准进行回顾性诊断，随访患者判定预后。应用直接测序法检测ASXL1第12外显子、IDH1第4外显子、IDH2第4外显子、SRSF2第1外显子、CALR第9外显子和MPL第10外显子突变状态，克隆后测序鉴定突变类型。比较基因突变患者与野生型患者的临床及实验室特征。 结果：127例PMF患者中ASXL1基因突变36例(28％)，SRSF2基因突变2例(1.6％)，未检出IDH1/2基因突变病例。ASXL1突变均为杂合突变，基因突变类型均为移码突变或无义突变，以G646Ffs*12最为常见。与不伴有ASXL1基因突变患者相比，伴有ASXL1的PMF患者外周血白细胞计数较高(P=0.004)，脾脏肿大程度更明显(P=0.001)，年龄＞65岁者比例较高(P=0.054)，染色体核型异常者比例较高(P=0.033)。两者在外周血血红蛋白浓度、血小板计数、外周血原始细胞比例、JAK2V617F突变率、DIPSS-plus染色体预后分组及DIPSS、DIPSS-Chinese和DIPSS-plus预后分组方面无显著差异。357例PMF患者中JAK2V617F基因突变178例(50％)，MPL基因突变11例(3％)，CALR基因突变76例(21％)，CALR突变均为杂合性移码突变，其中L367fs*46（Ⅰ类突变）26例(34％)，K385fs*47（Ⅱ类突变）47例(62％)。与伴有JAK2V617F患者相比，伴有CALR基因Ⅱ类突变的PMF患者年龄较小(P＜0.001)，外周血白细胞计数(P＜0.001)和血红蛋白浓度(P=0.001)较低，外周血原始细胞比例较高(P=0.009)，DIPSS和DIPSS-Chinese预后分组较高危组比例较高(P＜0.001)。CALR基因Ⅱ类突变患者中外周血血小板计数异常者比例较高(＜100x109/L P=0.01 or＞450x109/L P=0.042)，脾脏肿大者比例较低(P=0.004)。伴有CALRⅡ类突变的患者较伴有JAK2V617F突变患者总生存期明显缩短(P=0.003)。CALRⅡ类突变是独立于DIPSS-Chinese预后积分系统的不良预后因素(P=0.002，HR2.153，95％CI，1.32-3.51)，而ASXL1突变并非不良预后因素。 结论：ASXL1基因突变是中国PMF患者中常见的表观遗传学相关基因突变但其并非不良预后因素。CALR基因突变在非JAK2V617F或MPL基因突变的PMF患者中具有较高的突变率。伴有CALRⅡ类突变的患者较伴有JAK2V617F突变患者总生存期明显缩短，CALRⅡ类突变是独立于DIPSS-Chinese的不良预后因素。 第二部分原发性骨髓纤维化患者的细胞遗传学研究 研究目的：探索原发性骨髓纤维化(PMF)患者的细胞遗传学异常及其预后意义 研究方法：回顾Kaplan-Meier具Log-rank染色体COX果的原发性骨髓纤维化患者临床资料，应用Kaplan-Meier，Log-rank检验及COX回归模型评估影响预后的因素。 结果：439例具有可分析染色体核型结果的PMF患者中异常染色体核型者123例(28％)，其中复杂核型24例(20％)，单倍体核型15例(12％)，单纯+8核型异常21例(17％)，单纯20q-核型异常15例(12％)，单纯13q-核型异常9例(7％)。24例复杂核型中单倍体核型14例(58％)。123例染色体核型异常的PMF患者中，复杂核型者与非复杂核型者相比，伴有贫血的患者比例较高(P=0.016)，两者间年龄、性别、外周血白细胞计数、血小板计数、原始细胞比例、脾脏大小、体质性症状和DIPSS预后分组无显著差异。单倍体核型者与非单倍体核型者相比，两者间年龄、性别、外周血血红蛋白浓度、白细胞计数、血小板计数、原始细胞比例、脾脏大小、体质性症状和DIPSS预后分组无显著差异。单因素生存分析显示染色体核型异常、DIPSS-plus不良预后核型、单倍体核型和复杂核型是不良预后因素(P=0.007，0.022，0.032，0.034)。多因素分析显示单倍体核型是独立于DIPSS-Chinese的不良预后因素(P=0.003，HR3.339，95％ CI1.514-7.367)。 结论：中国PMF患者中染色体核型异常者比例较低，复杂核型、单纯+8核型异常、单纯20q-核型异常和单纯13q-核型异常为最常见的染色体核型异常。单倍体核型是独立于DIPSS-Chinese的不良预后因素。 第三部分血清铁蛋白是中国骨髓增生异常综合征IPSS中危-1组的独立预后因素 研究目的:分析原发初治骨髓增生异常综合征(MDS)IPSS中危-1组患者的预后因素。 研究方法:回顾性分析191例原发初治MDS IPSS中危-1组患者的临床资料并进行统计学分析。 结果:191例患者中位随访时间21（1-88）个月，中位生存期52个月。单因素分析中，血清铁蛋白≥500ug/L是原发初治MDS IPSS中危-1组的不良预后因素(P＜0.001)。此外，年龄≥60岁、ECOG体力状况评分≥2分、血小板(PLT)≤50×109/L、中性粒细胞绝对值(ANC)≤0.5×109/L、、骨髓造血组织面积＞80％、骨髓纤维化程度≥MF-1、骨髓细胞涂片原始细胞比例＞5％，不良染色体核型亦是不良预后因素（P值分别为0.002、0.006、0.001、0.0031、0.011、0.006、0.011和0.012）。虽然血红蛋白浓度(HGB)和血清铁蛋白呈负相关，但HGB并不影响患者预后(P＞0.05)。将上述单因素分析有预后意义的参数纳入COX多因素模型筛选，血清铁蛋白、ECOG体力状况评分、ANC、骨髓涂片原始细胞比例和染色体核型具有独立预后意义（P值分别为0.001、0.01、0.032、0.001和0.017）。选取血清铁蛋白、ECOG体力状况评分、ANC、骨髓涂片原始细胞比例和染色体核型提出了一个针对中国原发初治MDS IPSS中危-1组进行再次危度分层的预后积分系统，低危组、中危组、高危组患者的3年预期生存(PS)率别为83.7％、59.8％和27.7％，经Log-rank检验各组总体生存(OS)率差异有统计学意义(P＜0.001)。 结论:这一新的预后积分系统有望对原发初治MDS IPSS中危-1组患者进行二次预后分层，对于高危患者早期采取干预性治疗具有指导意义。

目录

第一部分 原发性骨髓纤维化患者基因突变的研究

摘要

前言

实验材料和仪器

实验方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 原发性骨髓纤维化患者的细胞遗传学研究

摘要

前言

病例和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 血清铁蛋白是中国骨髓增生异常综合征IPSS中危-1组的独立预后因素

摘要

前言

病例和方法

结果

讨论

参考文献

综述 新的基因突变与原发性骨髓纤维化的预后

附录 常见英文缩写

在学期间发表论文和会议报告

致谢

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