液相色谱-同位素稀释串联质谱法测定人血清中尿素、尿酸及肌酐的量值

摘要

人血清中尿素、尿酸与肌酐含量的测定是临床检测中关键的生化指标，为临床诊断和观察病情提供了依据。目前已有多种方法应用于临床实验室中尿素、尿酸与肌酐的含量测定，为保证测量结果的准确可比，实现测量的标准化迫切需要建立准确、可靠的参考方法，研制相关标准物质满足来临床检验的需求。
　　 本文以13C15N2-尿素作为内标，乙腈为蛋白沉淀剂，用带有电喷雾离子源的三重四极质谱的多重反应监模式(MRM)检测目标离子对(m/z61.1-44，64.1-46)，使用括号法定量，分别考查了血清尿素准确测量的所需的前处理条件、液相色谱分离条件、质谱条件和测量条件建立了测定血清中尿素的液相色谱-同位素稀释串联质谱方法。
　　 应用本法对两种浓度的血清尿素进行定值，结果的相对标准偏差(RSD)均小于1％，使用美国NIST标准物质909b Level I对方法进行验证，测量结果与靶值的偏差为-0.38％且在给定的不确定度范围内。方法的检测限为0.55μg/g(3倍信噪比)，方法的平均回收率为100.1％和99.9％，通过参加RELA2009血清尿素量值比对，进一步对方法进行确证。对盲样进行了准确测定，全面分析了影响测量结果的因素，并对不确定度进行了评定，对于两个水平的血清尿素不确定度分别为1.2％和0.84％。
　　 本文提出的血清中尿素测量的液相色谱-同位素稀释串联质谱法，原理可靠、前处理简单、定量准确，可作为血清尿素测量的候选参考方法。
　　 中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所组织了中、日、韩三国计量院的血清中代谢物(尿酸、肌酐)量值比对，应用液相色谱-同位素稀释串联质谱法对目标物进行测定，各国的测量结果等效一致。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 文献综述

1.1概述

1.1.1尿素

1.1.2尿素在人体中的代谢及临床意义

1.2血清中尿素的测定方法

1.2.1波氏比色法

1.2.2脲酶电极法

1.2.3脲酶速率法

1.2.4离子电导法

1.2.5二乙酰肟法

1.2.6邻苯二甲醛法

1.2.7干化学法

1.2.8气相色谱/同位素稀释质谱法

1.2.9液相色谱/大气压电离质谱法

1.3血清中尿酸、肌酐标准物质的测定方法

1.3.1液相色谱-同位素稀释谱法测定血清中尿酸

1.3.2气相色谱-同位素稀释谱法测定血清中肌酐

1.3.3液相色谱-同位素稀释谱法测定血清中肌酐

1.4本课题研究的目的和意义

1.4.1血清尿素参考方法的建立

1.4.2血清代谢物标准物(尿酸、肌酐)的质量值比对

1.5本课题的难点与创新点

第二章液相色谱-同位素稀释/串联质谱法测定血清中尿素

2.1仪器、试剂与实验材料

2.1.1仪器

2.1.2血清样品

2.1.3试剂

2.2溶液配制及样品预处理

2.2.1标准溶液配制

2.2.2校准比值混合溶液配制

2.2.3血清样品制备

2.3血清中尿素的测定实验方法选择

2.3.1沉淀剂用量

2.3.2色谱条件

2.3.3质谱条件

2.3.4分析过程

2.3.5数据处理

2.4结果与讨论

2.4.1方法的精密度

2.4.2回收率

2.4.3线性范围和检测限

2.4.4方法的确证

2.5定值结果

2.6小结

第三章血清尿素的量值比对-RELA 2009

3.1仪器、试剂与实验材料

3.1.1仪器

3.1.2血清样品

3.1.3试剂

3.2溶液配制及样品预处理

3.2.1标准溶液配制

3.2.2校准比值混合溶液配制

3.2.3血清样品制备

3.3血清中尿素测量条件

3.3.1色谱条件

3.3.2质谱条件

3.3.3分析过程

3.4测量结果

3.5测量不确定度分析

3.5.1随机因素产生的不确定度

3.5.2非随机因素产生的不确定度

3.6不确定度计算

3.6.1尿素测量不确定度

3.7比对样品定值结果

3.7.1血清中尿素-水平A

3.7.1血清中尿素-水平B

3.8小结

第四章血清代谢物标准物质(尿酸、肌酐)的量值比对

4.1仪器与试剂

4.1.1仪器

4.1.2血清样品

4.1.3试剂

4.2血清中尿酸测量条件

4.2.1液相色谱测量条件

4.2.2质谱测量条件

4.2.3溶液配制

4.2.4样品前处理

4.3血清中肌酐测量条件

4.3.1液相色谱测量条件

4.3.2质谱测量条件

4.3.3溶液配制

4.3.4样品前处理

4.4测定与计算方法

4.5测量结果

4.5.1血清中代谢物(多组分)标准物质-水平1

4.5.2血清中代谢物(多组分)标准物质-水平2

4.6测量不确定度分析

4.6.1随机因素产生的不确定度

4.6.2非随机因素产生的不确定度

4.7不确定度计算

4.7.1尿酸测量不确定度

4.7.2肌酐测量不确定度

4.8标准物质定值结果

4.8.1血清中代谢物(多组分)标准物质-水平1

4.8.2血清中代谢物(多组分)标准物质-水平2

4.9标准物质量值的国际验证

4.10小结

第五章结论

参考文献

致谢

研究成果及发表的学术论文

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