声明
摘要
缩略词简表
1．1合成生物学
1．2代谢工程
1．3丙二酰辅酶A的简介
1．4利用酿酒酵母合成丙二酰辅酶A的研究进展
1．4．1酿酒酵母乙酰辅酶A及丙二酰辅酶A合成途径
1．4．2提高酿酒酵母丙二酰辅酶A合成的研究进展
1．5丙二酰辅酶A生物传感器在酿酒酵母中的构建及应用
1．5．1基于FapO-fapR表达系统的丙二酰辅酶A生物传感器的构建及应用
1．6人工合成酵母基因组国际计划(Sc2．0 Project)简介
1．7合成型酿酒酵母基因组
1．7．1 合成型酿酒酵母基因组的改造策略
1．7．2合成型酿酒酵母基因组的研究意义
1．7．3基因组重排技术SCRaMbLE的原理和应用
1．8本论文研究的主要内容及意义
2．1培养基
2．2实验试剂
2．3主要实验仪器设备
2．4微生物技术方法
2．4．1菌体培养
2．4．2菌种保藏
2．4．3外加诱导物调控Cre酶使基因组发生突变
2．5分子生物学操作技术
2．5．1引物合成及基因测序
2．5．2 PCR技术
2．5．3 DNA纯化技术
2．5．4酶切反应
2．5．5质粒构建技术
2．5．6大肠杆菌转化及阳性转化子的筛选
2．5．7大肠杆菌质粒的提取
2．5．8酿酒酵母转化
2．5．9酿酒酵母质粒提取
2．5．10酿酒酵母基因组提取
2．5．11琼脂糖凝胶电泳
2．5．12点滴点板技术
2．5．13酿酒酵母基因组整合与基因敲除技术
2．5．14酿酒酵母总RNA的提取及RNA反转录
2．6菌株发酵与产物的检测
2．6．1荧光检测
2．6．2流式细胞分析及分选
2．6．3摇瓶发酵
2．6．4 3-羟基丙酸的提取及检测
2．6．5碳源分析及中间代谢产物的分析
2．6．6 3-羟基丙酸浓度标准曲线的制备
第三章通过基因组重排技术进行合成型5号染色体(synV)酿酒酵母的突变筛选高丙二酰辅酶A合成菌株
3．1引言
3．2质粒，菌株与引物
3．2．1质粒
3．2．2菌株
3．2．3引物
3．3 质粒与菌株的构建
3．4结果与讨论
3．4．1基因组重排系统诱导条件的确定
3．4．2探索构建基于颜色的高丙二酰辅酶A筛选系统
3．4．3基于荧光的高丙二酰辅酶突变体的高通量筛选
3．4．4在突变菌株中构建3-羟基丙酸合成途径并检测其产量
3．5本章小结
第四章通过加强乙酰辅酶A的合成增加丙二酰辅酶A及下游产物的积累
4．1前言
4．2菌株，质粒和引物
4．2．1质粒
4．2．2菌株
4．2．3引物
4．3结果与分析
4．4本章小结
全文总结
展望
附录
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
学位论文评阅及答辩情况表
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