声明
1 文献综述
1.1 猪繁殖与呼吸综合征简介
1.2 PRRSV 病原学概述
1.2.1 PRRSV 的分类及分型
1.2.2 PRRSV 理化性质及培养特性
1.3 PRRSV 分子生物学特征
1.3.1 PRRSV 基因组结构特点
1.3.2 PRRSV 结构蛋白
1.3.3 PRRSV 非结构蛋白
1.3.4 PRRSV 的传播途径及临床症状
1.4 PRRSV 感染机制
1.4.1 PRRSV 的感染过程
1.4.2 PRRSV 的感染特点
1.5 PRRSV 感染诱导的免疫应答反应
1.5.1 先天性免疫应答
1.5.2 体液免疫应答
1.5.3 细胞免疫应答
1.6 PRRSV 的诊断与预防
1.6.1 PRRSV 的诊断
1.6.2 PRRSV 的预防
1.7 单克隆抗体在PRRSV 研究中的应用
1.8 研究目的及意义
2 多肽的偶联及鉴定
2.1 实验材料
2.1.1 仪器及设备
2.1.2 试剂与耗材
2.1.3 实验溶液
2.2 实验方法
2.2.1 多肽-BSA 人工完全抗原的制备
2.2.2 多肽-BSA 人工完全抗原的鉴定
2.3 实验结果
2.3.1 完全抗原蛋白浓度测定结果
2.3.2 SDS-PAGE 电泳鉴定结果
2.3.3 间接ELISA 检测结果
2.4 讨论
2.5 小结
3 PRRSV GP3 蛋白免疫显性肽段单克隆抗体的研制
3.1 实验材料
3.1.1 仪器与设备
3.1.2 耗材与试剂
3.1.3 实验溶液
3.1.4 实验动物和细胞
3.2 实验方法
3.2.1 动物免疫
3.2.2 间接ELISA 检测小鼠血清效价
3.2.3 SP2/0 细胞株复苏并扩大培养
3.2.4 小鼠饲养细胞的制备
3.2.5 小鼠脾细胞的制备
3.2.6 细胞融合
3.2.7 阳性克隆孔的筛选
3.2.8 阳性孔的亚克隆
3.2.9 杂交瘤细胞的储存
3.2.10 细胞系稳定性鉴定
3.2.11 单克隆抗体腹水的制备及纯化
3.2.13 纯化前后腹水效价测定
3.2.14 单克隆抗体亲和力的测定
3.3 实验结果
3.3.1 间接ELISA 检测小鼠血清效价
3.3.2 杂交瘤细胞株的建立
3.3.3 阳性克隆孔筛选结果
3.3.4 杂交瘤细胞株稳定性鉴定结果
3.3.5 单克隆抗体浓度与纯度的测定
3.3.6 1E5 单克隆抗体的效价测定
3.3.7 1E5 单克隆抗体的亲和力测定
3.4 讨论
3.5 小结
4 单克隆抗体与PRRSV GP3蛋白反应性的鉴定
4.1 实验材料
4.1.1 仪器及设备
4.1.2 耗材与试剂
4.1.3 实验溶液、病毒与载体
4.2 PRRSV GP3 蛋白的原核表达
4.2.1 引物设计
4.2.2 构建PET-28a-GP3 表达载体
4.2.3 连接产物的转化
4.2.4 阳性克隆菌筛选
4.2.5 重组蛋白表达及纯化
4.2.6 重组GP3 蛋白浓度测定
4.3 单克隆抗体与GP3 蛋白反应性的鉴定
4.3.1 间接ELISA 分析
4.3.2 免疫印迹分析
4.3.3 DOT-ELISA 分析
4.4 单克隆抗体与PRRSV 反应性鉴定
4.4.1 IPMA 检测单克隆抗体与PRRSV JXA1-R 的反应性
4.4.2 IFA 检测单克隆抗体与PRRSV JXA1-R 的反应性
4.5 实验结果
4.5.1 GP3 蛋白的表达及鉴定
4.5.2 单克隆抗体与GP3 蛋白反应性的鉴定结果
4.5.3 单克隆抗体与PRRSV 反应性鉴定结果
4.6 讨论
4.7 小结
5 结论
参考文献
附录 英文缩略词表
致谢
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果
郑州大学;
